分析胰岛人体脂肪干细胞对Ⅰ型糖尿病治疗潜能

论文导读：
摘要：背景Ⅰ型糖尿病的胰岛移植治疗一直面对供体来源不足与免疫排斥两大关键不足，寻找一种自体来源的种子细胞通过组织工程策略制备类胰岛组织可以提供充足新型供体、降低异基因供体移植的副反应。目的探讨成人脂肪干细胞（Humanadipose-derived stem cells, hASCs）体外分化为对葡萄糖敏感、可分泌胰岛素的功能性胰岛样细胞团（Islet-pke clusters, ILCs）的能力，探讨体外制备类胰岛组织的技术路线，观察诱导后胰岛样细胞团对Ⅰ型糖尿病的治疗效果。策略首先分离纯化人体脂肪干细胞，利用流式细胞浅析、多向诱导分化等策略鉴定其干细胞特性，采取新型植物诱导剂Conophylpne（CNP）与其它诱导因子的不同组合将脂肪干细胞诱导分化为胰岛样细胞团，观察不同组合的诱导分化效率，并利用特异性染色、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），免疫细胞化学等策略对诱导分化后的细胞团在基因水平与蛋白水平上进行鉴定，ELISA法检测细胞团在不同浓度葡萄糖刺激下胰岛素的分泌情况，最后将诱导后的胰岛样细胞团移植到Ⅰ型糖尿病小鼠体内，观察小鼠血糖变化，评价其对血糖水平的调节作用。结果数据显示脂肪干细胞具有多能干细胞特性，可诱导分化为具有胰岛素分泌和葡萄糖浓度反应性类胰岛细胞团；Conophylpne与尼克酰胺联合诱导可大幅度提升诱导分化效率；移植ILCs的糖尿病小鼠血糖水平在一周内恢复正常。结论脂肪干细胞具有广阔的临床运用前景，具备用来替代异体胰岛组织通过移植治疗治Ⅰ型糖尿病的可能。关键词：脂肪干细胞论文胰岛样细胞团论文糖尿病论文胰岛素论文分化论文
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ABSTRACT4-9
第一章 前言9-15

1.1 糖尿病9-11

1.1 糖尿病近况9

1.2 糖尿病的发病机制9

1.3 糖尿病的治疗策略9-11

1.2 脂肪干细胞11-12

1.2.1 脂肪干细胞的发现与命名11

1.2.2 脂肪干细胞的优势11

1.2.3 脂肪干细胞分化为胰岛素分泌细胞11-12

1.3 诱导因子的多样性12

1.4 Conophylpne12-13

1.4.1 Conophylpne 介绍12-13

1.4.2 Conophylpne 推动胰岛β细胞的增殖与再生13

1.4.3 诱导机制13

1.5 本课题的探讨目的与探讨案例13-15

第二章 人体脂肪干细胞的分离、培养与鉴定15-24

2.1 实验材料15-17

2.

1.1 组织来源15

2.

1.2 主要试剂15-16

2.

1.3 主要实验仪器与设备16

2.

1.4 溶液的配制16-17

2.2 实验策略17-18

2.1 hASCs 的体外分离与原代培养17

2.2 hASCs 的传代培养17

2.3 生长曲线的测定17

2.4 流式细胞术检测 hASCs 表面特异性蛋白17-18

2.5 统计策略18

2.3 结果18-22

2.3.1 脂肪干细胞的分离历程18

2.3.2 hASCs 的形态学观察18-20

2.3.3 生长曲线20-21

2.3.4 hASCs 的表面抗原特点21-22

2.4 讨论22-24

第三章 体外诱导 hASCs 向脂肪、成骨细胞分化的实验探讨24-34

3.1 实验材料24-26

3.

1.1 细胞来源24

3.

1.2 主要试剂24-25

3.

1.3 主要实验仪器与设备25

3.

1.4 溶液的配制25-26

3.2 实验策略26-30
3.

2.1 hASCs 的分离培养与鉴定26

3.

2.2 体外诱导 hASCs 分化为脂肪细胞、成骨细胞26

3.

2.3 特异性染色26

3.

2.4 RT-PCR 检测诱导后细胞基因表达情况26-29

3.

2.5 免疫细胞化学浅析29-30

3.3 结果30-33

3.1 诱导细胞的形态变化与特异性染色30-31

3.2 RT-PCR 浅析诱导后细胞的基因表达情况31-32

3.3.3 免疫细胞化学检测 Leptin、Osteopontin 蛋白的表达32-33

3.4 讨论33-34

第四章 Conophylpne 尼克酰胺联合高效诱导 hASCs 为功能性类胰岛细胞34-45论文导读：

4.1 实验材料34-36

4.

1.1 细胞来源34

4.

1.2 主要试剂34-35

4.

1.3 主要仪器与设备35

4.

1.4 溶液的配制35-36

4.2 实验策略36-38
4.

2.1 hASCs 的分离培养与鉴定36

4.

2.2 体外诱导 hASCs 分化为胰岛样细胞团36

4.

2.3 双硫腙染色36-37

4.

2.4 RT-PCR37

4.

2.5 免疫细胞化学浅析37

4.

2.6 葡萄糖刺激胰岛素分泌实验37-38

4.

2.7 统计策略38

4.3 结果38-42
4.

3.1 细胞形态变化38-39

4.

3.2 双硫腙染色39

4.

3.3 不同诱导方式胰岛素的分泌量39-40

4.

3.4 RT-PCR 检测诱导后细胞的基因表达情况40-41

4.

3.5 免疫细胞化学浅析41

4.

3.6 葡萄糖刺激胰岛素分泌（GSIS）41-42

4.4 讨论42-45
第五章 胰岛样细胞团体内移植治疗Ⅰ型糖尿病小鼠的潜能45-53

5.1 实验材料45-46

5.

1.1 实验动物45

5.

1.2 主要试剂45

5.

1.3 主要实验仪器45-46

5.

1.4 溶液的配制46

5.2 实验策略46-47
5.

2.1 实验动物的选择与分组46

5.

2.2 2%STZ 柠檬酸溶液的制备46

5.

2.3 Ⅰ型糖尿病模型的构建46

5.

2.4 细胞移植46-47

5.

2.5 体重与血糖检测47

5.

2.6 统计策略47

5.3 结果47-50
5.

3.1 Ⅰ型糖尿病小鼠模型的构建47-48

5.

3.2 细胞移植后小鼠的血糖变化情况48-49

5.

3.3 细胞移植后小鼠体重、生长情况浅析49-50

5.4 讨论50-53
第六章 结论与展望53-55

6.1 结论53-54

6.2 展望54-55

参考文献55-61
发表论文和参加科研情况说明61-62
附录62-63
致谢63