关于发酵维生素C发酵营养与环境条件优化研究站

论文导读：
【摘 要】维生素C在发酵培养的过程中，通过利用自身的酶系来将L-山梨糖转换成维生素C的前体即2-酮基-L-古龙酸。通过控制温度、pH的值以及溶养的浓度，从而能够为发酵创造一个良好的环境条件，最终能够促使它们的健康发展。本文主要对维生素C发酵营养与环境条件的优化进行了研究，从而能够清楚的了解到维生素C发酵营养与环境条件的关系。
【关键词】维生素C；发酵营养；环境条件的优化
1 发酵生产维生素C相关的材料与方法

1.1 发酵生产维生素C的微生物

发酵生产维生素C中相关的微生物主要包括了小菌和大菌这两个部分。

1.2 发酵生产维生素C中相关的培养基

在发酵过程中，主要的培养基包括了种子培养基以及发酵培养基。在种子培养基中，有2%的L-山梨糖、有0.2%的葡萄糖、有0.5%的玉米浆、有0.2%的碳酸钙、有0.1%的尿素，并且在种子培养基中，pH值是6.7。然而在发酵培养基中，有8.0%的L-山梨糖、有1.0%的玉米浆、有1.0%的尿素、有0.5%碳酸钙、有0.1%磷酸二氢钾，有0.01%硫酸镁，并且在发酵培养基中，pH值是7.2。

1.3 发酵生产维生素C相关的培养方法

在维生素C发酵生产中，主要的培养方法包括了种子培养、摇瓶发酵培养以及发酵罐发酵培养这三个步骤。种子培养的方法，主要是指在装有250mL种子培养基的750mL的三角瓶中滴入5mL菌悬液，在此方法中要转速保持在每一分钟200转，然而温度要保持在30摄氏度，并且培养的时间一般都是24小时。在摇瓶发酵培养的方法中，在装有20mL种子培养基的500mL的三角瓶中进行接种，此时的培养的温度是30摄氏度，并且摇床的转速要保持在每一分钟200转，培养的时间一般都是72小时。在发酵罐发酵培养的方法中，在3L全自动发酵灌装要装1.5L的液体，在进行培养的过程中要保持30摄氏度的温度，并且对于pH值以及相关的溶氧水平要根据实验过程中的要求来分别进行控制。

1.4 具体的分析方法

（1）对于2-KLG浓度进行测定的时候，要采用碘量法
在10mL的比色管中要滴入发酵上的清液3mL，并且要加入5mL的硫酸和2mL的蒸馏水，在温度达到100摄氏度下，进行长达25分钟的下水浴，与此同时在500mL的三角瓶中，要通过加入4至5滴0.1mol/L的淀粉溶液来作为指示剂，并且要将终点定为0.1mol/L的标准碘液一直滴定到蓝色才结束。
（2）对于L-山梨糖浓度进行测定的时候，要采用蒽酮硫酸法
在10mL的比色管中，将适当的浓度的发酵上清液的0.2mL中滴入其中，然后使得冰浴能够将1mL0.2%蒽酮硫酸溶液吸入，在吸入的过程中要保持混合度的均匀。在进行混合的时候要将温度保持在25摄氏度以下，并且在此温度下要保持10分钟的静置反应，然后再通过使用70%硫酸进行稀释，一直稀释到刻度的位置。与此同时，要在波长620纳米的位置进行吸光度的测定，并且要通过使用蒸馏水来作为空白对照，从而能够查清标准曲线的换算浓度。
（3）有关菌体干重的测量方法
在50mL的离心管中，放入20mL的发酵液，要将离心转动保持在每分钟2200转，沉淀大菌以及杂质的时候要保持在10分钟的时间。然后在通过加入1mol/L HCL进行洗涤和沉淀两次。在另一个50ml的离心管中要将上清液倒入，要将此时的离心转动保持在每分钟1000转，在20分钟之后，将上面的清液倒掉，并且要将温度升至105摄氏度进行烘干，然后等到重量保持在平稳的状态下进行称重。
（4）有关山梨糖脱氢酶酶活测定的方法
在发酵培养基中，要将混合的菌种接种至其中，在培养24个小时之后，通过取500ml的发酵液，经过离心在每分钟2000转的运行之后，这样可以将杂志和大菌去除掉，然后再通过离心每分钟10000转的运行，从而可以对小菌菌体进行收集，并且用pH值为7.0的磷酸钾缓冲液进行两次的洗涤之后，然后将其悬浮在一样的缓冲液中，此时的超声波破碎的时间是15分钟，离心的转动是每分钟12000转，从而可以将上清液收集起来。
（5）2-KLG还原酶酶活测定的方法
在温度保持在30摄氏度，并且保温效果在30分钟的水浴中加入0.05mol/LpH值为7.2的磷酸钾缓冲液中，待测的上清液，0.02mol/L氢化钠的论文导读：只有在合适的pH值的范围内才能够发挥出足够大的活性。第三，通过pH值可以使得培养基中的营养物质以及中间代谢产物的离解形式得到了改变，从而使得细胞正常的代谢过程受到了严重的影响，最终影响了代谢产物的质量和产量。3不同的溶养浓度对2-KLG发酵过程的影响不同的溶养浓度对2-KLG具有不同的影响。在高溶养的浓度下，
溶液以及25%的2-KLG。同时要取1.0mL的上清液，在1厘米光程的石英比色皿中注入0.1mL的氢化钠溶液，然后再通过添加磷酸钾缓冲液从而可以使得液面达到2.7mL的高度，最后再将0.3mL的2-KLG的溶液注入其中，此时的总体积达到了4.1mL，并且要在340纳米的深度对光吸收值的变化进行测定，并且在间隔30秒的地方读一次数，反应的时间保持在5分钟。在计算直线斜率的时候，要将每60秒引起的0.001个OD值下降作为一个酶活力的单位，此时的横坐标是指时间，纵坐标是指OD值的变化。
2 有关环境中pH指对2-酮基-L-古龙酸合成的重要影响
为了能够很好地促进细胞的生长，这就要特别注重细胞的生长环境，并且影响环境最重要的因素是指pH值。环境中pH指对2-酮基-L-古龙酸合成的重要影响主要表现在以下几个方面：第一，在细胞的质膜的电荷中，pH值的变化导致了它的不断变化，从而能够改变质源于：毕业设计论文范文www.7ctime.com
膜对个别离子渗透性，从而不利于细胞对培养基中营养物质的吸收和利用，并且也不利于代谢产物的排放，最终不利于菌体的生长。第二，pH值对细胞内酶的活性起着一个重要的影响，细胞中的酶系只有在合适的pH值的范围内才能够发挥出足够大的活性。第三，通过pH值可以使得培养基中的营养物质以及中间代谢产物的离解形式得到了改变，从而使得细胞正常的代谢过程受到了严重的影响，最终影响了代谢产物的质量和产量。
3 不同的溶养浓度对2-KLG发酵过程的影响
不同的溶养浓度对2-KLG具有不同的影响。在高溶养的浓度下，细胞的生长情况是良好的。在溶养浓度在50%以下，细胞的数量在逐渐减少。为了能够促进细胞的健康生长，这就要求要控制好溶养的浓度。
4 结束语
在细胞生长的过程中，由于受到种种因素的影响，这就使得要特别注重细胞生长的环境。不同的溶养浓度对2-KLG的分批发酵产生了不同的影响，为了能够很好的保证2-KLG发酵的各种参数的正常，这就要求要合理的控制溶养的浓度，从而能够为2-KLG分批发酵创造一个良好的发酵环境。在细胞的生长过程中，要合理的控制其中的pH值，从而使得pH值达到了规定的要求，从而有利于细胞的健康生长。
参考文献：
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