试述蛋白乙肝表面抗原S蛋白与纤维蛋白原α链相互作用验证及功能学期刊

论文导读：于细胞质中。（2）内源性免疫共沉淀结果：成功确认FGA是HBsAg中小S蛋白（HBS）结合蛋白一种候选蛋白。（3）细胞功能学探讨表明：FGA蛋白与HBS蛋白结合后的HepG2细胞增殖加速、凋亡增快、迁移与侵袭能力未见显著变化。而FGA蛋白表达或者高表达HBS蛋白的细胞均推动增殖，单独表达FGA的细胞抑制凋亡、迁移与侵袭能力，单独表达HBS的细胞推
摘要：目的：证实纤维蛋白原α链（FGA）作为乙型肝炎表面抗原S蛋白(HBS)结合蛋白一种候选蛋白,探讨二者相互作用后在肝癌发生进展历程中的生物学功能。策略：1.提取人HepG2细胞RNA，用RT-PCR策略扩增出FGA基因。将PCR产物克隆进真核载体pcDNA6内，构建含FGA基因的重组真核表达质粒。同样利用PCR技术，以HBS质粒为模板扩增HBS基因,构建pCMV4-Flag-HBS基因表达质粒(实验室已构建成功)，分别将重组质粒转染293FT细胞，用免疫荧光和Western blot等策略检测FGA及HBS在293FT细胞中的表达。2.通过免疫共沉淀策略以及激光共聚焦试验验证HBS蛋白与FGA相互结合并明确HBS和FGA空间定位。3.构建靶向FGA重组干扰质粒siFGA-Pu6,转染HepG2细胞以及HBS的稳转株中，筛选出4种稳转株（pCMV4+pU6,pCMV4+siFGA,HBs+pU6,andHBs+siFGA）。通过细胞CCK-8增殖实验、细胞凋亡实验、Transwell实验，探讨FGA在肝癌细胞HepG2生长、侵袭、凋亡等方面的作用。通过蛋白芯片以及western blot实验进一步探讨其分子机制。结果：(1) Western blot结果显示：FGA抗体孵育在72KD位置有目的条带，与预期结果一致；HBS抗体孵育在约26KD位置有预期蛋白表达。免疫荧光结果显示：FGA蛋白与HBS蛋白二者共同有着于细胞质中。（2）内源性免疫共沉淀结果：成功确认FGA是HBsAg中小S蛋白（HBS）结合蛋白一种候选蛋白。（3）细胞功能学探讨表明：FGA蛋白与HBS蛋白结合后的HepG2细胞增殖加速、凋亡增快、迁移与侵袭能力未见显著变化。而FGA蛋白表达或者高表达HBS蛋白的细胞均推动增殖，单独表达FGA的细胞抑制凋亡、迁移与侵袭能力，单独表达HBS的细胞推动凋亡、迁移与侵袭能力。（4）干扰细胞中FGA的表达后，可抑制信号通路中促增值因子Bcl-XL和Mcl-1的表达，并增加促凋亡因子蛋白的表达，并促使HepG2细胞中T磷酸化。结论：（1）成功构建了含FGA基因真核表达质粒。（2）纤维蛋白原α链是HBsAg中小S蛋白（HBS）结合蛋白一种候选蛋白。（3）FGA能够影响HepG2细胞增殖、凋亡，迁移侵袭能力。（4）FGA与HBS结合后可调控Bcl-2以及Akt信号通路蛋白的表达。关键词：纤维蛋白原α链（FGA）论文乙肝表面抗原S蛋白（HBS）论文结合蛋白论文
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Abstract5-7
英文缩略词表7-9
前言9-11
材料与试剂11-16
实验策略16-35
实验结果35-42
结论42-43
讨论43-44
参考文献44-47
致谢47-48
综述48-55
参考文献52-55