谈细胞因子五味子多糖提取纯化及其对肠道免疫功能影响技巧

论文导读：
摘要：近年来，大量的探讨表明五味子多糖具有多种生理保健功能，但是，五味子多糖对肠道免疫功能的影响尚不清楚。本探讨从五味子干果为主要原料，采取超滤的办法制备了具有较高纯度的五味子精多糖，探讨了五味子精多糖诱导肿瘤细胞凋亡，从及对小鼠肠道免疫调节的意义。主要探讨结果如下：1.确定五味子精多糖的最佳制备工艺。五味子干粉脱脂后，于55℃热水中浸提2h；将提取液通过100Ku的超滤膜进行分离纯化，最佳的超滤压力是0.207Mpa，操作温度为20℃，超滤时间30min膜通量基本稳定；超滤液除去蛋白后经过巴氏灭菌和冻干后得到平均分子量为210ku的五味子精多糖。2.将制备的五味子精多糖溶于培养基使终浓度分别为0、0.05、0.1、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2mg/L意义于MC7721肝癌细胞，结果显示，在短时间处理（24~48h）时，五味子多糖对肝癌细胞没有明显的抑制生长意义(P＞0.05)，较高剂量在24h时甚至有一定推动增殖意义，在较长处理时间（72h）时，五味子多糖体现明显的肝癌细胞生长抑制和推动凋亡意义(P＜0.05)，其剂量大小与细胞生存率呈负相关。吖啶橙、溴化乙锭染色多糖意义肝癌细胞72h显示，空白组细胞几乎都呈绿色，形态完整，贴壁生长，多糖浓度0.05、0.5、2.0mg/L组别的橙死亡细胞数量显著增多，细胞的形态和大小杂乱无章，贴壁生长的细胞边缘变得模糊不清，细胞发生凋亡现象，并与剂量呈正相关，进一步说明了五味子精多糖能够抑制MC7721肝癌细胞的生长。3.分别利用高（500mg/Kg d）、中（200mg/Kg d）、低剂量（50mg/Kg d）五味子多糖粉对BALB/c小鼠进行灌胃15天。小肠肠液中SIgA、小肠组织中各主要细胞因子含量经过前7天左右波动期后，基本处于稳定。在前七天免疫应答高峰期，IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10等细胞因子先后出现峰值，小鼠肠道黏膜免疫体系先后出现细胞免疫占主导地位、体液免疫占主导地位后免疫应答逐渐趋缓。10~15天长期灌胃结果显示：五味子精多糖可从推动肠道SIgA的分泌量，其SIgA的含量与剂量呈正相关。流式细胞仪对肠系膜淋巴结（MLN）的T淋巴细胞表型分析显示，高、中剂量组均能明显增大CD3+CD4+与CD3+CD8+比例，结合之前细胞因子和SIgA含量变化，推断高、中剂量的五味子多糖论文导读：
是依靠增多CD3+CD4+表型辅助性T细胞不同亚群细胞数量来增大该比例的，其中高剂量组可从增多Th2亚群的细胞数量和活性，中剂量组可从增多Th1、Th2亚群细胞活性和数量，低剂量组的CD3+CD4+与CD3+CD8+比例同对照组差别不明显(P＞0.05)，但可从增多Th1、Th2细胞的活性。4.中剂量（200mg/Kg d）、低剂量（50mg/Kg d）五味子多糖灌胃可从推动肠道黏膜免疫水平，同时提升体液免疫和细胞免疫能力，保持肠道免疫平衡，对抵抗外界异物感染、保证机体肠道健康最为有利；高剂量组（500mg/Kg d）可提升肠道体液免疫水平，但造成了肠道细胞免疫受到抑制，机体对外界异物不敏感，不利于机体肠道健康。关键词：五味子论文精多糖论文肠道免疫功能论文抗癌意义论文MC7721论文细胞因子论文
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Abstract9-11
1 前言11-26

1.1 立题背景11-12

1.2 五味子的营养成分极为价值12-13

1.2.1 五味子的营养成分12-13

1.2.2 五味子的食用、药用价值13

1.3 五味子多糖探讨发展13-15

1.4 多糖的探讨办法15-17

1.4.1 多糖的提取办法15

1.4.2 多糖的除杂办法15-16

1.4.3 多糖的纯化办法16-17

1.5 多糖的抗肿瘤生物活性17-19

1.5.1 多糖对肿瘤细胞的直接抑制意义17-18

1.5.2 多糖的抗突变意义18

1.5.3 多糖抑制肿瘤血管形成意义18

1.5.4 多糖作为免疫增强剂抗肿瘤18-19

1.5.5 多糖抗肿瘤复发和转移19

1.6 肠道黏膜免疫功能的评价19-24

1.6.1 肠道黏膜免疫体系19-20

1.6.2 肠道黏膜免疫的效应因子——SIgA20

1.6.3 Th1/Th2 平衡与免疫的联系20-21

1.6.4 细胞因子调节肠道免疫21-24

1.7 课题探讨目的和作用24

1.8 课题探讨的内容24-26

2 材料与办法26-39

2.1 试验材料26-28

2.

1.1 主要试剂26-27

2.

1.2 主要仪器和设备27-28

2.2 试验办法28-39

2.1 五味子多糖水提取液的制论文导读：

备28-29

2.2 超滤纯化五味子多糖工艺的优化29-30

2.3 五味子精多糖的制备30-31

2.4 五味子精多糖的纯度与分子量测定31

2.5 五味子精多糖体外抑制肝癌细胞实验31-33

2.6 五味子精多糖的小鼠灌胃实验33-34

2.7 小鼠的解剖与样品处理办法34-35

2.8 指标测定35-38

2.9 数据分析38-39

3 结果与分析39-55

3.1 标准曲线的绘制39

3.

1.1 总糖含量标准曲线39

3.

1.2 蛋白质含量标准曲线39

3.2 五味子多糖超滤条件的优化39-41
3.

2.1 超滤压力、时间对超滤效率的影响39-40

3.

2.2 超滤温度对超滤效率的影响40-41

3.

2.3 重复渗滤次数对杂质含量的影响41

3.3 去蛋白精多糖冻干粉纯度、分子量鉴定41-43

3.4 五味子精多糖的抑制肝癌细胞生长意义43-45

3.5 分泌型免疫球蛋白 A（SIGA）的含量测定45-46

3.6 细胞因子含量的测定46-52

3.6.1 白细胞介素 2（IL-2）含量的变化46-47

3.6.2 白细胞介素 4（IL-4）含量的变化47-48

3.6.3 干扰素γ（IFN-γ）含量的变化48

3.6.4 IFN-γ与 IL-4 比例的变化48-49

3.6.5 白细胞介素 10（IL-10）含量的变化49-50

3.6.6 转化生长因子β1（TGF-β1）含量的变化50-51

3.6.7 小结51-52

3.7 肠系膜淋巴结（MLN）T 淋巴细胞表形变化52-55

4 讨论55-57

4.1 不同超滤条件对五味子多糖纯化的影响55

4.2 不同剂量五味子精多糖对肝癌细胞生长的抑制意义55

4.3 不同剂量五味子精多糖对小鼠小肠液 SIGA 含量影响55-56

4.4 小鼠肠道组织中细胞因子含量变化的极为相互联系56

4.5 五味子精多糖对肠系膜淋巴结 T 淋巴细胞的影响56-57

5 结论57-58
致谢58-59
参考文献59-64
攻读硕士期间发表的学术论文64