论脱氢高效液相色谱法快速测定食品中脱氢乙酸

论文导读：
摘要：本文采用乙腈提取食品中脱氢乙酸，注入高效液相色谱进行测定，以保留时间定性，采用外标法定量。本方法的线性方程有良好的相关性，R=0.9997。方法加标回收率为96.2%～99.6%，变异系数RSD值为1.09%。该方法操作简便、准确，回收率高，精密度良好，重现性好，可用于食品中脱氢乙酸的测定。
关键词：高效液相色谱法 脱氢乙酸 食品检测
脱氢乙酸具有较强抑制细菌、霉菌及酵母菌发酵的作用，尤其对霉菌的抑制作用最强，是一种高效的防霉、防腐剂。其还具有脂溶性强、热稳定性高的特点，在摄氏120℃的杀菌温度下仍保持杀菌能力不变。国外曾广泛使用于食品、药品中，我国自上世纪70年代中其开始用于食品防腐，曾用于果汁、酱菜、腐乳、干酪、人造奶油、乳酸菌饮料、月饼、果酱等食品。脱氢乙酸的缺点是毒性较强，目前我国允许在腐乳、酱菜、果蔬汁、肉类制品、糕点、月饼、焙烤馅料中作为防腐剂使用，最大使用量0.5克/公斤。脱氢乙酸的国标检测方法为气相色谱法，样品经过有机溶剂的萃取、净化、浓缩等步骤的复杂处理，并且脱氢乙酸在气相色谱条件下色谱峰出现拖尾现象，使定性、定量影响较大。据报道利用高效液相色谱法食品中脱氢乙酸，采用纯水、乙醇-水、碱性水对样品进行超声萃取处理，萃取液经过滤后上机检测。作者在试验中发现，利用脱氢乙酸难溶于水而易溶于甲醇、乙醇、乙腈等有机溶剂的特性，样品均浆后酸化处理，用乙腈提取，经微孔过滤后用高效液相色谱进行定性、定量测定，方源于：毕业论文指导记录www.7ctime.com
法的灵敏度、准确度和回收率高，精密度良好，重现性好，前处理简便快捷，更能满足样品分析要求。

一、材料与方法

（一）仪器
Waters公司的高效液相色谱仪，1525泵，2486检测器，717自动进样器，BREEZ色谱管理软件；Waters C18 5um，4.6 mm X 250 mm色谱柱。旋涡混合器，离心机TGL-10B，MILLI-Q，超纯水机。
（二）试剂
乙腈 色谱纯
乙酸铵 分析纯
氯化钠 分析纯
脱氢乙酸，纯度99.9%（日本生产）

(三)测定方法

1、色谱条件

流动相 乙腈—0.02mol / ml乙酸铵溶液（15+85）
流速

1.0 ml / min

温度 35℃
进样量 10 μl

2、实验方法

实验样品材料用一般市售的果汁、酱菜、腐乳、糕点等食品。果汁样品精确称取5.00 g于50 ml的离心管中；酱菜、腐乳、糕点等食品样品事先均匀，准确称取2.0～3.0 g于50ml的离心管中，加入5mL饱和氯化钠溶液和1ml盐酸溶液（1 ：1），用旋涡混合器混合1分钟，准确加入10mL乙腈，用旋涡混合器混合3分钟，3000转离心15分钟，取上清液经0.45μm过滤器过滤后供液相色谱测定。

3、色谱分析

按1.3.1色谱条件对样液进行分析，采用外标法，以保留时间定性，以峰面积定量，测定样液中脱氢乙酸的浓度（mg/ml）。

二、结果与讨论

(一)检测波长的确定

根据扫描的结果，脱氢乙酸的最大吸收波长在230 nm和297 nm处，230 nm处吸收较强，但基体于扰较多，在波长297NM处基体干扰较少，故选取检测波长297NM。

(二)流动相的选择

流动相为乙腈+水时，脱氢乙酸峰形拖尾，使用0.02 mol / L的乙酸铵代替水作流动相，峰形得到较大的改善。乙腈的比例影响出峰的时间和响应，乙腈的比例低，保留时间长，响应也会低，乙腈比例高时，出峰时间短，响应也较高。试验表明，当0.02 mol / L的乙酸铵—乙腈比例为85：15时效果较好。

(三)提取液的选择

脱氢乙酸难溶于水，易溶于苯、氯仿、。脱氢乙酸钠则易溶于水，选用水或氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液提取，提取液须净化后方可使用。本方法选用乙腈作提取液，主要考虑到脱氢乙酸能溶液于乙腈，乙腈的水溶性有利于乙腈从酸性的样液中把脱氢乙酸完全溶解，同时乙腈可沉淀蛋白质，与脂肪不溶，离心分离得到干净的提取液。

(四)色谱分离

在1.3.1色谱条件下测定，脱氢乙酸的保留时间为

5.775min，峰形及组分分离效果好，色谱图见图1。

图1脱氢乙酸色谱图

(五)标准曲线

以70%乙腈水溶液为溶剂配制浓度0.0论文导读：围内的脱氢乙酸标准使用液，测定结果见表1。以峰面积对脱氢乙酸浓度进行回归分析得回归方程式Y=2.39X×108–1.33×105，R=0.9997，线性良好。在对同一浓度标样连续进样5次，得到脱氢乙酸的峰面积和保留时间的RSD值分别为0.35%和0.24，方法的定性和定量准确度较高。表1脱氢乙酸标准系列测定结果

(六)方法的回收率和精密度试

1～0.1范围内的脱氢乙酸标准使用液，测定结果见表1。以峰面积对脱氢乙酸浓度进行回归分析得回归方程式Y=2.39X×108–1.33×105，R= 0.9997，线性良好。在对同一浓度标样连续进样5次，得到脱氢乙酸的峰面积和保留时间的RSD值分别为0.35%和0.24，方法的定性和定量准确度较高。
表1 脱氢乙酸标准系列测定结果

(六)方法的回收率和精密度试验

称取不含脱氢乙酸的腐乳3g样品3份，分别加入0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.6mg、1.0mg脱氢乙酸标样，按1.3.2、1.3.3和1.3.4步骤处理测定，经计算，加标回收率为9

6.2%～99.6%，平均回收率为98.6%。

选择添加有脱氢乙酸的腐乳样品，按按1.3.2、1.3.3和1.3.4步骤对同一样品分别做6次平衡测定，测定结果值分别为0.193、0.196、0.195、0.199、0.196和0.194g/kg，测得标准偏差

2.14×103，变异系数RSD值为1.09%。

(七)样品测定

应用本方法对市售产品果汁、酱菜、腐乳、月饼中脱氢乙酸含量量的测定，结果详见表2。
表2 市售样品中脱氢乙酸测定结果
参考文献：
陈小平，龚劭刚.脱氢乙酸的合成与应用[J].化工时刊，2005，19（4）：7～8
骆萌.脱氢乙酸及相关化合物生产技术[J].化工中间体，2004，1（7）：31～33