浅论洁泽1号对上皮细胞抗白色念珠菌天然免疫相关因子影响实验大专

论文导读：0为14.7033mg/ml，意义时间为24小时；小檗碱对VK2/E6E7的IC10为6.1645μmol/L，意义时间为12小时；甘露聚糖对VK2/E6E7的IC10为1234下一页
摘要：第一部分：洁泽1号对人上皮细胞抗白色念珠菌TLR2、MyD88mRNA影响的实验探讨目的：观察中药复方洁泽1号极为主药有效成分小檗碱对永生化人上皮细胞（VK2/E6E7）天然免疫因子TLR2、MyD88mRNA的影响，研究洁泽1号是否可能通过TLRs信号途径在人上皮细胞抗白色念珠菌天然免疫中发挥意义，为明确洁泽1号预防和治疗外阴假丝酵母菌病的机制提供进一步的实验依据。办法：设置空白对照组（单独培养的VK2/E6E7）、白色念珠菌热灭活孢子与VK2/E6E7共培养（比例为10:1）各时间段组（1h，3h，6h，12h，24h，48h）。提取各组细胞总RNA，实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)检测细胞TLR2、MyD88mRNA的表达。药物预防实验：设置空白对照组，模型组（VK2/E6E7与白色念珠菌共孵育），细胞+洁泽1号+白色念珠菌组、细胞+小檗碱+白色念珠菌组、细胞+甘露聚糖+白色念珠菌组（药物与细胞共孵育后，再加入白色念珠菌共培养）。药物治疗实验：设置空白对照组，模型组（白色念珠菌与VK2/E6E7共孵育），细胞+白色念珠菌+洁泽1号组、细胞+白色念珠菌+小檗碱组、细胞+白色念珠菌+甘露聚糖组（白色念珠菌与细胞共孵育后，再加入药物）。MTT法检测最低无细胞物浓度。各组细胞培养相应时间后，吸弃细胞上清液，提取细胞总RNA，通过实时定量PCR检测各组细胞中TLR2、MyD88mRNA的表达。结果：1.实时定量PCR各组Ct值表明，人上皮细胞VK2/E6E7中构成性表达TLR2、MyD88mRNA。白色念菌热灭活孢子与VK2/E6E7共培养后，TLR2、MyD88mRNA表达量呈升高走势。共培养12h时，细胞TLR2、MyD88mRNA的表达量最高，与空白对照组相比统计学具有极明显性差别（P0.01）；24h后，表达量开始下降。而24h MyD88mRNA表达量与空白对照组相比，仍具有明显性差别（P0.05）。2.洁泽1号、小檗碱、甘露聚糖对VK2/E6E7细胞的毒性实验：MTT法检测药物细胞毒性：洁泽1号对VK2/E6E7的IC10为14.7033mg/ml，意义时间为24小时；小檗碱对VK2/E6E7的IC10为6.1645μmol/L，意义时间为12小时；甘露聚糖对VK2/E6E7的IC10为论文导读：
24.1823mg/ml，意义时间为2小时。3.洁泽1号、小檗碱、甘露聚糖对VK2/E6E7细胞TLR2、MyD88的影响：预防实验：与空白对照组相比，模型组细胞TLR、MyD88mRNA表达升高，差别统计学有极明显作用（P0.01）；与模型组相比，洁泽1号和小檗碱预防组各因子mRNA表达量均显著降低（P0.01），洁泽1号组与小檗碱组组间相比无显著差别；甘露聚糖预防组TLR2、MyD88表达亦降低（P0.01），（P0.05）。治疗实验：与模型组相比，洁泽1号组TLR2、MyD88亦升高（P0.01），（P0.05）；小檗碱组TLR2、MyD88表达均升高（P0.05）；甘露聚糖组各因子变化无统计学作用（P＞0.05）。结论：人上皮细胞VK2/E6E7中构成性表达TLR2、MyD88mRNA。白色念珠菌热灭活孢子与细胞共培养一定时间后，TLR2的表达显著升高；其下游因子MyD88的表达量也有升高走势，说明白色念珠菌热灭活孢子可被VK2表面TLR2识别，并启动下游因子，可能通过MyD88依赖性途径介导天然免疫反应。TLR2在人上皮细胞识别白色念珠菌并启动宿主免疫防御中起一定意义。洁泽1号预处理细胞后，能明显抑制天然免疫因子TLR2、MyD88的表达，限制局部炎症反应；而对于已感染白色念珠菌的细胞，洁泽1号能在感染早期推动细胞的天然免疫功能，此功能可能是通过TLR2-MyD88依赖性途径实现。第二部分：洁泽1号对人上皮细胞抗白色念珠菌HBD-2及IL-8、IL-1β影响的实验探讨目的：观察中药复方洁泽1号极为主药有效成分小檗碱对永生化人上皮细胞（VK2/E6E7）HBD-2mRNA及IL-8、IL-1β蛋白表达的影响，研究洁泽1号在抗白色念珠菌感染时，是否通过影响细胞分泌表达炎性因子的能力来抵御感染，为明确洁泽1号预防和治疗外阴假丝酵母菌病的机制提供进一步的实验依据。办法：HBD-2预防与治疗实验分组和实验办法：同第一部分。IL-8、IL-1β实验分组：预防实验：设置空白对照组，模型组（VK2/E6E7与白色念珠菌共孵育），细胞+洁泽1号组、细胞+小檗碱组（仅用药物处理细胞），细胞+洁泽1号+白色念珠菌组、细胞+小檗碱+白色念珠菌组（药物与细胞共孵育后，再加入白色念珠菌共培养）。治疗实验：设置空白对照组，模型组（白色念珠菌与细胞共孵育），细胞+白色论文导读：的转变。预防性利用洁泽1号或小檗碱，能使细胞感染白色念珠菌时分泌IL-8的能力增强。而洁泽1号对VK2细胞分泌IL-1β无影响。关键词：洁泽1号论文人上皮细胞论文白色念珠菌论文TLR2论文MyD88论文洁泽1号论文人上皮细胞论文上一页1234下一页
念珠菌+洁泽1号组、细胞+白色念珠菌+小檗碱组（白色念珠菌与细胞共孵育后，再加入药物）。IL-8、IL-1β实验办法：各组细胞加入相应药物或菌共孵育一定时间，再直接加入相应数量的白色念珠菌或相应浓度的药物继续共孵育，提取上清液，ELISA检测各组细胞上清液中IL-8、IL-1β的含量。结果：1.洁泽1号、小檗碱、甘露聚糖对VK2/E6E7HBD-2表达的影响：与空白对照组相比，模型组HBD-2表达量升高（P0.01），与模型组相比，洁泽1号、小檗碱、甘露聚糖预防组HBD-2表达量降低，其差别统计学有极明显作用（P0.01）。与模型组相比，洁泽1号治疗组HBD-2表达升高（P0.05），而小檗碱、甘露聚糖组HBD-2表达量降低（P0.01）。2.洁泽1号、小檗碱对VK2/E6E7细胞分泌IL-8、IL-1β的影响：预防实验：与空白对照组相比，模型组IL-8表达降低，其差异统计学有极明显作用（P 0.01），洁泽1号组IL-8表达无显著变化，小檗碱组IL-8降低（P 0.01）；与模型组相比，洁泽1号及小檗碱预防组IL-8表达量均升高（P 0.01）；洁泽1号预防组与洁泽1号组相比，IL-8表达量下降（P 0.01）；小檗碱预防组较小檗碱组相比，IL-8表达量升高（P 0.01）。IL-1β表达量在各组间无显著变化。治疗实验：与模型组相比，洁泽1号治疗组IL-8表达无显著变化，而小檗碱组IL-8表达降低（P 0.05）。IL-1β表达量在各组间无显著变化。结论：洁泽1号预防感染时，能明显抑制细胞HBD-2mRNA的表达，此可能是限制局部炎症反应机制之一；而对于已感染白色念珠菌的细胞，洁泽1号能在感染早期推动细胞表达HBD-2mRNA，可对白色念珠菌起到一定的杀伤意义。人上皮细胞VK2能自主分泌IL-8及少量IL-1β，白色念珠菌热灭活孢子与细胞共孵育后，能降低细胞分泌IL-8的能力，可能是其致病理由之一，对IL-1β分泌无影响。而洁泽1号不会引起VK2细胞分泌IL-8能力的转变。预防性利用洁泽1号或小檗碱，能使细胞感染白色念珠菌时分泌IL-8的能力增强。而洁泽1号对VK2细胞分泌IL-1β无影响。关键词：洁泽1号论文人上皮细胞论文白色念珠菌论文TLR2论文MyD88论文洁泽1号论文人上皮细胞论文论文导读：30目的19材料和办法19-26结果26-29附图29-30二、洁泽1号对人上皮细胞抗白色念珠菌TLR2、MyD88mRNA表达影响的实验探讨30-38目的301．材料302.办法30-33结果33-38结论38-39第二部分洁泽1号对人上皮细胞抗白色念珠菌HBD-2、IL-8、IL-1β影响的实验探讨39-46

一、洁泽1号对人上皮细胞抗白色念珠菌HBD-2

白色念珠菌论文HBD-2论文IL-8论文IL-1β论文
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中文摘要6-10
Abstract10-16
前言16-19
第一部分 洁泽 1 号对人上皮细胞抗白色念珠菌 TLR

2、MyD88 mRNA 影响的实验探讨19-39

一、白色念珠菌对人上皮细胞 TLR

2、MyD88 mRNA 表达的影响19-30

目的19 材料和办法19-26
结果26-29
附图29-30
二、洁泽 1 号对人上皮细胞抗白色念珠菌 TLR

2、MyD88 mRNA 表达影响的实验探讨30-38

目的30
1．材料30

2. 办法30-33

结果33-38
结论38-39
第二部分 洁泽 1 号对人上皮细胞抗白色念珠菌 HBD-

2、IL-8、IL-1β影响的实验探讨39-46

一、洁泽 1 号对人上皮细胞抗白色念珠菌 HBD-2 mRNA 的影响39-41

目的39
材料和办法39
结果39-41

二、洁泽 1 号对人上皮细胞抗白色念珠菌 IL-8、IL-1β的影响41-46

目的41
材料和办法41-43
结果43-46
结论46
讨论46-50
参考文献50-54
综述54-67
参考文献62-67
致谢67