探究注射液核磁共振对吐温80与中药化学成分相互作用

论文导读：NMR谱δ8.30ppm峰出现情况并进一步进行了核磁共振二维谱的测定,考察吐温80中所含杂质对δ8.30ppm峰新物质生成的影响。希望通过我们的探讨,对吐温80与中药化学成分的相互作用的规律有一个初步的认识。策略(1)文献：以吐温80为关键词,系统检索到目前为止的PubMed、WileyOnpneLibrary、Science、ScienceDirec、Highwire、Biom
摘要：目的中药注射剂的不良反应已受到人们的高度重视,过多地把“责任”推给吐温80的说法不能自圆其说。我们对吐温80在化学不稳定性方面的探讨进行了文献整理和浅析,认为,在进行中药注射剂不良反应的探讨历程中,除了把作为溶质的中药化学成分和作为溶剂的吐温80纳入考虑的范畴外,还应该充分地考虑到中药化学成分和吐温80的相互作用的不足。由此,我们以含有吐温80的中药注射剂----鱼腥草注射液出发,对吐温80与中药化学成分之间是否会相互反应产生新物质进行了探讨性探讨。根据核磁共振氢谱(1H NMR)可以在溶液状态中比较全面地反映物质结构信息的性质,我们在吐温80与鱼腥草挥发油的混合溶液的1H NMR谱中发现了有新物质峰(δ8.30ppm峰)出现,而鱼腥草挥发油中的醛类化合物的醛基质子峰显著下降甚至消失。另外,我们同时发现,鱼腥草注射液的1H NMR中也出现了δ8.30ppm的物质峰,而醛基质子峰峰度极低。围绕鱼腥草注射液的1H NMR谱δ8.30ppm新物质峰的出现和醛基质子峰峰度降低的这个现象,我们考察了鱼腥草注射液中、吐温80与鱼腥草挥发油混合物中δ8.30ppm峰随时间、温度不同的变化情况,探讨了δ8.30ppm峰新物质的溶解性质,考察了不同产家的吐温80对鱼腥草挥发油的影响,考察了多个化合物分别与吐温80混合后的1H NMR谱δ8.30ppm峰出现情况并进一步测定了月桂醛与吐温80的混合溶液的核磁共振二维谱,探讨月桂醛与吐温80相互反应的最佳物质量比和最佳反应时间,考察了多个中药注射液的1H NMR谱δ8.30ppm峰出现情况并进一步进行了核磁共振二维谱的测定,考察吐温80中所含杂质对δ8.30ppm峰新物质生成的影响。希望通过我们的探讨,对吐温80与中药化学成分的相互作用的规律有一个初步的认识。策略(1)文献：以吐温80为关键词,系统检索到目前为止的PubMed、Wiley Onpne Library、Science、ScienceDirec、Highwire、Biomed Central、CNKI等国内外多个数据库,引用42篇相关的参考文献,按有机化学反应的分类,对吐温80的不稳定性进行了文献的整理和综述。(2)核磁共振技术：采取400.17MHz频率的核磁共振仪,对化合物与吐温80的混合液进行检测,扫描16次,测定温度295K,溶剂D2O的化学位移为δ4.70pp论文导读：NMR。(5)中药注射液的探讨：将买来的中药注射液进行冷冻干燥,取冻干粉约20mg用重水溶解,测定’HNMR。(6)吐温80中杂质的探讨：浅析吐温80中可能有着的杂质,选取对δ8.30ppm峰新物质形成影响比较大的杂质(月桂酸或油酸),与吐温80、月桂醛进行混合后,加入0.5mL重水,混匀后检测’HNMR。结果(1)文献中关于吐温80化学不稳定方面包
m、CDC13的化学位移为δ7.26ppm,以信噪比来衡量质子峰的大小和反映被测物质的含量,对化合物与吐温80混合后的、H NMR谱与化合物本身、吐温80本身的’H NMR谱图数据进行比对,指认新产生的物质峰以及考察新物质峰的变化情况。(3)新物质稳定性考察：鱼腥草注射液一经生产出来就置于阴凉避光的室温(20℃)中放置,作为0月加速试验的样品。进行高温加速试验的注射液样品置于人工气候箱中,设定40℃恒温、75%RH恒湿条件下。在放置1月、2月、3月后,分别作为1、2、3月加速试验的样品。各样品在加速试验期满后,取出安瓿瓶,打开,直接冷冻干燥至干,粉末以0.5mL D20溶解,测定’H NMR。对出厂生产的鱼腥草注射液置于阴凉避光的室温(20℃)中放置3个月,作为室温贮存的样品。另外,部分样品放置于冰箱的冷藏箱中,设定温度为4℃,也放置3个月,作为低温贮存的样品。这2个样品在贮存期满后,打开安瓿瓶,冷冻干燥至干,粉末以0.5mL D2O溶解,测定’H NMR。(4)化合物探讨：将购买的各个化合物和实验室自制的鱼腥草挥发油分别与吐温80混合,搅匀,逐滴加入0.5~0.6mL重水,边加边摇匀,室温放置48b,测定’H NMR。(5)中药注射液的探讨：将买来的中药注射液进行冷冻干燥,取冻干粉约20mg用重水溶解,测定’H NMR。(6)吐温80中杂质的探讨：浅析吐温80中可能有着的杂质,选取对δ8.30ppm峰新物质形成影响比较大的杂质(月桂酸或油酸),与吐温80、月桂醛进行混合后,加入0.5mL重水,混匀后检测’H NMR。结果(1)文献中关于吐温80化学不稳定方面包括：水解反应、络合反应、自氧化反应、聚合反应、光降解反应和其它尚不明确的化学反应。(2)刚出厂合格的鱼腥草注射液的的’H NMR谱中的醛基峰几乎消失,出现了δ8.30ppm新物质峰,并且该新物质峰在鱼腥草注射液加速1个月显著升高,再加速2个月、3个月不再显著变化。在低温和室温放置3个月,两种情况下的新物质峰高度相当且都较低,但是高温放置3个月,新物质峰则出现显著升高。鱼腥草挥发油的’H NMR谱有显著的δ9.60ppm的醛基峰,没有δ8.30ppm物质峰,吐温80的1H NMR谱在6~10ppm范围都不出现物质峰,而鱼腥草挥发油与吐温80混合后的1H NMR谱中出现了δ8.30ppm物质峰,位于δ9.60pp论文导读：
m位移的醛基峰的降低或消失。将鱼腥草挥发油与吐温80的混合液室温放置5个月后检测1H NMR谱,新物质峰出现显著升高。(3)用萃取分离鱼腥草注射液,检测层和水层的1H NMR谱。δ8.30ppm峰新物质出现在水层,同时在该峰附近δ8.50ppm处又出现了一个新峰；层的谱图中有δ9.60ppm醛基峰,在δ8.30ppm及其附近没有出现任何物质峰。(4)选取来自国内外4个不同产家的吐温80分别与鱼腥草挥发油、不同的醛类化合物混合后检测1H NMR谱。4个产家有3家的吐温80与鱼腥草挥发油混合后产生了δ8.30ppm新峰,而没有产生δ8.30ppm峰的国药集团产的吐温80与醛类化合物混合后又产生了δ8.30ppm物质峰。(5)选取不同类型的40个化合物分别与吐温80混合后检测1H NMR谱。有34个化合物与吐温80混合后的1H NMR谱有异常峰出现,其中29个产生了显著的δ8.30ppm新物质峰,其它5个则产生了别的异常物质峰。薯蓣皂苷等6个化合物与吐温80混合后没有发生变化。月桂醛与吐温80的混合液的H-H COSY没有出现与δ8.30ppm峰相关的物质峰,其放置一个月后的的HMQC谱显示δ8.30ppm物质峰与166.pm的碳相关联。月桂醛与吐温80不同摩尔比混合(分别为0.1：1、0.33：1、1：1、3.3：1、10：1),室温放置0月、1月、2月,测定1H NMR谱；0月时,5个样品的醛基峰随月桂醛的浓度增大而升高,而产生的δ8.30ppm新物质峰高度相当；放置1个月后,醛基峰均显著降低,而δ8.30ppm峰显著升高,且信噪比都在8左右,并在δ8.10ppm处出现了异常峰；放置2个月后,醛基峰不再下降,δ8.30ppm新物质峰也不再升高,δ8.10ppm异常峰稍有升高。(6)对16个中药注射液(含有吐温80的注射液11个、不含吐温80的注射液5个)的1H NMR谱进行测定。复方当归注射液等11个含有吐温80的中药注射液,除莪术油注射液外,1H NMR谱图都产生了δ8.30ppm物质峰。红花注射液等5个不含吐温80的注射液也都产生了δ8.30ppm物质峰。对红花、野木瓜等6个中药注射液,测定了核磁共振二维谱,只有不含吐温80的丹参注射液和红花注射液产生了与δ8.30ppm峰相关的13C峰,其余4个注射液未见与δ8.30ppm峰相关的13C峰。经查阅论文导读：m峰相关的13C峰。(7)吐温80中的杂质可能有环氧乙烷、过氧化物等副反应产物,这些成分大多不稳定且有毒,在国家药典中是有明确含量限制的。吐温80中可能含有来自合成原料油酸、月桂酸等杂质,为此将月桂酸+吐温80+月桂醛、油酸+吐温80+月桂醛的两种混合物测定了’HNMR谱,可见δ8.30ppm峰并没有升高,放置一个月后再检测,δ8.30p
相关文献数据,产生δ8.30ppm峰的物质可能是丹参注射液中的丹参酮Ⅰ和红花注射液中的腺苷。但是,板蓝根注射液也可能含有腺苷,但没有见到与δ8.30ppm峰相关的13C峰。(7)吐温80中的杂质可能有环氧乙烷、过氧化物等副反应产物,这些成分大多不稳定且有毒,在国家药典中是有明确含量限制的。吐温80中可能含有来自合成原料油酸、月桂酸等杂质,为此将月桂酸+吐温80+月桂醛、油酸+吐温80+月桂醛的两种混合物测定了’H NMR谱,可见δ8.30ppm峰并没有升高,放置一个月后再检测,δ8.30ppm峰也没有显著变化。结论(1)吐温80的稳定性和安全性是相对的。(2)吐温80会使鱼腥草挥发油中的醛类成分发生变化形成δ8.30ppm峰新物质,鱼腥草注射液也含有该新物质。该新物质的形成受温度的影响较大。(3)δ8.30ppm峰新物质为水溶性且具有对热不稳定的性质,用萃取后鱼腥草注射液的水层的氢谱图δ8.50ppm位移处出现一个新峰,很可能是δ8.30ppm峰物质在萃取挥干历程中发生了分解或异构的缘故。(4)δ8.30ppm峰新物质的产生与吐温80的产家或来源无关。(5)吐温80能使多数中药化合物形成δ8.30ppm峰新物质,也可能形成其他新物质物质峰；形成的δ8.30ppm峰很可能是一个孤立醛基质子峰：形成δ8.30ppm峰新物质的最佳反应物质量比为3.3：1,反应时间为三个月或以上(6)中药注射液’H NMR谱δ8.30ppm峰的产生与注射液是否含有吐温80没有必定的联系,不含吐温80的注射液中的δ8.30ppm峰的产生可能与其本身含有相关结构的化合物有关。(7)吐温80中的酸类杂质成分对δ8.30ppm峰新物质的生成影响不大。关键词：聚山梨酯80论文核磁共振论文鱼腥草注射液论文相互作用论文中药注射液论文化合物论文醛论文
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ABSTRACT10-17
前言17-22
参考文献20-22
第一部分 综述22-33
第一章 吐温80的化学稳定性文献探讨22-33
引言22
1 吐温80的水解反应22-23
2 吐温80的络合反应23-24
3 吐温80的自氧论文导读：
化反应24-25
4 吐温80的自氧化反应机理25-27
5 吐温80与蛋白质药物的聚合反应27-28
6 吐温80的光降解反应28
7 其它反应28
8 结论和讨论28-29
参考文献29-33
第二部分 实验部分33-103
第二章 吐温80对鱼腥草挥发油的影响试验33-38
1 仪器与试剂33
2 策略与结果33-36

2.1 吐温80的~1H NMR测定33

2.2 鱼腥草挥发油的提取和~1H NMR测定33-34

2.3 鱼腥草挥发油与吐温80混合后溶液的~1H NMR测定34-35

2.4 鱼腥草挥发油久置后的~1H HMR测定35-36

3 结论与讨论36-37
参考文献37-38
第三章 吐温80对鱼腥草注射液的影响探讨38-42
1 仪器与试剂38
2 策略和结果38-40

2.1 吐温80的~1H NMR测定38

2.2 鱼腥草注射液加速试验样品的~1H NMR测定38-40

2.3 不同温度贮存后鱼腥草注射液的~1H NMR测定40

3 结论与讨论40-41
参考文献41-42
第四章 鱼腥草注射液的萃取分离探讨42-46
1 仪器与试剂42
2 策略与结果42-45

2.1 萃取分离鱼腥草注射液(1)42-43

2.2 萃取分离鱼腥草注射液(2)43-44

2.3 萃取分离鱼腥草注射液(3)44-45

3 结论和讨论45-46
第五章 中药化合物与吐温80混合后的~1H NMR测定46-64
1 仪器与试剂46-47
2 策略与结果47-63

2.1 吐温80的~1H NMR测定47-48

2.2 中药化合物与吐温80混合后的~1H NMR谱测定48-54

2.3 结果浅析54-63

3 结论与讨论63
参考文献63-64
第六章 不同厂家生产的吐温80对新物质形成的影响探讨64-68
1 仪器与试剂64
2 策略与结果64-67

2.1 四个厂家的吐温80与鱼腥草挥发油混合后的~1H NMR谱64-65

2.2 苯甲醛、肉桂醛、月桂醛分别与sigma和国药产吐温80相互混合反应65-67
3 结论与讨论67-68
第七章 月桂醛与吐温80混合后的核磁共振测定探讨68-83
1 仪器与试剂68
2 策略与结果68-82

2.1 月桂醛、肉桂醛分别与吐温80混合后的~1H NMR谱测定68-69

2.2 检测样品dod+sig80、月桂醛和吐温80的~1H NMR、~(13)CNMR及C-H相关谱69-71
2.3 样品dod+论文导读：献101-103第三部分课题总结103-104个人简历及攻读学位期间发表文章情况104-106致谢106-107备注107上一页123456
sig80、月桂醛和吐温80的MS谱测定71

2.4 月桂醛与吐温80以不同摩尔浓度比相互混合的~1H NMR测定探讨71-82

4 结论与讨论82
参考文献82-83
第八章 中药注射液的核磁共振氢谱检测探讨83-98
1 仪器与试剂83-84
2 策略与结果84-95

2.1 16个中药注射液样品的~1H NMR测定84-86

2.2 16个中药注射液样品的~1H NMR测定结果浅析86-87

2.3 红花注射液及野木瓜注射液的二维核磁共振谱的测定87-91

2.4 丹参等4种中药注射液的核磁共振谱的测定91-95

3 结论与讨论95-96
参考文献96-98
第九章 吐温80中可能的酸类杂质对新物质产生的影响考察试验98-103
1 仪器与试剂98
2 策略与结果98-101

2.1 酸类成分对新物质形成的影响浅析98-100

2.2 检测肉桂醛、肉桂酸和吐温80三者混合后的~1H NMR谱100

2.3 不同的醛、不同的酸与吐温80混合后的~1H NMR测定100-101

2.4 对样品dod+doa的新物质产生的时间影响因子考察101

3 结论与讨论101
参考文献101-103
第三部分 课题总结103-104
个人简历及攻读学位期间发表文章情况104-106
致谢106-107
备注107