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浅谈肿瘤裂蹄层孔菌活性及其抑制肿瘤转移分子机制

最后更新时间:2024-01-30 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:30341 浏览:135834
论文导读:蹄层孔菌发酵产物的化学成分,得到了一系列化合物,为裂蹄层孔菌发酵物的现代药理学探讨奠定了基础。最后,深入探讨了裂蹄层孔菌的活性成分Hispolon的抑制肿瘤转移的分子机制,发现Hispolon可以通过抑制ROS/p-ERK/Slug/E-cadherin这一通路抑制乳腺癌细胞的转移。主要结果如下:

1.以裂蹄层孔菌中的黄酮组分为指标,对其液体深层发酵

摘要:裂蹄层孔菌(Phelpnus pnteus)是一种多年生稀贵药用真菌,属多孔菌科(Polyporaceae)。随着自然环境的恶化,裂蹄层孔菌药材资源已成稀缺,如何解决药材资源也是发挥裂蹄层孔菌药用价值的关键。自古至今裂蹄层孔菌一直运用于治疗痢疾、出血、肿瘤等疾病,但古代医书和民间用药一直以经验作为用药依据,对该菌的描述比较笼统,缺乏药效成分浅析和作用机理的阐述。本论文通过针对黄酮组分的裂蹄层孔菌发酵培养基和发酵条件优化,建立了裂蹄层孔菌药材大规模培养的工艺技术;进一步浅析了裂蹄层孔菌发酵产物的化学成分,得到了一系列化合物,为裂蹄层孔菌发酵物的现代药理学探讨奠定了基础。最后,深入探讨了裂蹄层孔菌的活性成分Hispolon的抑制肿瘤转移的分子机制,发现Hispolon可以通过抑制ROS/p-ERK/Slug/E-cadherin这一通路抑制乳腺癌细胞的转移。主要结果如下:1.以裂蹄层孔菌中的黄酮组分为指标,对其液体深层发酵的工艺进行了优化,得到了较优的培养基组成:3%葡萄糖、2%乳糖、1%牛肉膏、0.3%豆饼粉、0.1%KH2PO4和0.05%MgSO4,并发现添加豆饼粉可以显著增加黄酮的产量,优化后的黄酮产量可达初始培养基的4倍。进一步浅析表明,发酵历程中添加豆饼粉可以显著增加黄酮组分的抗氧化活性,但抗肿瘤活性反而降低。2.利用现代波谱学技术(NMR、MS、HR-MS、IR等)对裂蹄层孔菌的发酵菌丝和发酵液的化学成分进行系统探讨浅析,共分离鉴定13个不同化合物,包括链状倍半萜类新化合物2个、黄酮类化合物2个、甾醇类化合物2个以及其他一些小分子化合物,并对两种新化合物进行了抗肿瘤活性筛选。运用GC-MS技术,对裂蹄层孔菌发酵菌丝的乙酸乙酯萃取物中的挥发性成分进行系统浅析,以中鉴定出12种化合物,包括3种环二肽类化合物、2种甾醇类化合物、6种多不饱和脂肪酸类化合物,其中环二肽类化合物为首次以该种真菌中鉴定出来。3.论文深入探讨了裂蹄层孔菌的活性成分Hispolon抑制乳腺癌细胞转移的分子机制。首先我们建立了TPA诱导乳腺癌MCF-7细胞转移的模型,加入诱导剂TPA后,ROS水平在短时间内显著上升,激活一系列胞外信号激酶如ERK、JNK、p38、T等;在该历程中,E-cadherin的转录抑制因子Snail和Slug的表达增加,导致E-cadherin的转录抑制,论文导读:
最终引起上皮性标志物E-cadherin的表达减少、伴随EMT转变,细胞的转移能力增加。探讨表明,Hispolon首先抑制TPA诱导的胞内ROS水平的升高,进而抑制胞外信号激酶ERK的磷酸化,再作用于转录抑制因子Slug使其表达下降,Slug的减少导致其对E-cadherin基因转录的抑制作用减少、E-cadherin蛋白表达增加,最终体现为细胞间的粘附能力增加,抑制乳腺癌细胞的转移,以而基本揭示了Hispolon抑制乳腺癌转移的分子机制。综上所述,本论文解决了裂蹄层孔菌这一珍贵药用真菌的人工资源化不足,系统探讨了裂蹄层孔菌的活性成分,剖析了Hispolon抑制乳腺癌转移的分子机制,揭示了裂蹄层孔菌的药用物质基础,为药用真菌现代化新药开发提供条件和论述依据。关键词:裂蹄层孔菌论文黄酮类论文化学成分论文Hispolon论文ROS论文抑制肿瘤转移论文EMT论文
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Abstract6-11
第1章 绪论11-29

1.1 裂蹄层孔菌探讨进展11-19

1.1 裂蹄层孔菌化学成分探讨11-16

1.2 裂蹄层孔菌的抗肿瘤活性探讨16-19

1.2 EMT及其相关的分子机制19-27

1.2.1 E-cadherin下调:Snail和GSK-3β的功能20-22

1.2.2 作用于酪氨酸激酶受体的生长因子相关的信号机制22-23

1.2.3 EMT中与TGF-β、Wnt/β-catenin、ECM相关的信号通路23-27

1.3 本论文的主要探讨内容和作用27-29

第2章 裂蹄层孔菌发酵工艺优化29-45

2.1 引言29-30

2.2 材料30-31

2.1 菌株与细胞系30

2.2 药品和试剂30

2.3 主要仪器30-31

2.3 策略31-34

2.3.1 菌种培养31-32

2.3.2 黄酮组分的提取,纯化和检测32-33

2.3.3 裂蹄黄酮的生物活性测定33

2.3.4 数据统计浅析33-34

2.4 结果和讨论34-44

2.4.1 碳源对菌丝量和黄酮产量的影响34-36

2.4.2 氮源对菌丝生长和黄酮产量的影响36-38

2.4.3 豆饼粉对菌丝生长和黄论文导读:上一页123

酮产量的影响38-39

2.4.4 添加豆饼粉对黄酮组分发酵动力学影响39-41

2.4.5 添加豆饼粉对裂蹄黄酮的抗肿瘤和抗氧化活性的影响41-44

2.5 本章小结44-45

第3章 裂蹄层孔菌活性成分探讨45-59

3.1 引言45-46

3.2 仪器与材料46

3.3 策略46-48

3.1 发酵培养46

3.2 提取与分离46-47

3.3 挥发性样品溶液的制备47

3.4 GC和MS条件47

3.5 MS质谱检索47-48

3.4 结果与讨论48-58

3.4.1 裂蹄层孔菌活性成分浅析48-51

3.4.2 化合物1和2的结构剖析51-53

3.4.3 化合物理化及波谱数据53-56

3.4.4 菌丝乙酸乙酯部位的GC-MS浅析56-58

3.5 本章小结58-59

第4章 裂蹄层孔菌活性成分抗肿瘤机理探讨59-81

4.1 引言59-60

4.2 材料60-62

4.

2.1 细胞系60

4.

2.2 药品和试剂60-61

4.

2.3 主要实验设备61-62

4.3 策略62-64
4.

3.1 细胞培养62

4.

3.2 肿瘤细胞的生长抑制试验62-63

4.

3.3 活性氧自由基(ROS)的检测63

4.

3.4 Transwell小室细胞侵袭实验63

4.

3.5 蛋白免疫印迹(Western blot)63-64

4.

3.6 数据统计浅析64

4.4 结果和讨论64-80

4.1 倍半萜类化合物1和2的抗肿瘤活性探讨64-66

4.2 TPA诱导乳腺癌MCF-7细胞转移模型探讨66-72

4.3 Hispolon抑制MCF-7细胞迁移的分子机制探讨72-80

4.5 本章小结80-81

第5章 探讨成果与展望81-83

5.1 本论文主要探讨成果81

5.2 本论文的不足及对后续工作的倡议81-83

参考文献83-99
新化合物的图谱99-105
缩略词一览105-107
攻读博士学位期间主要的探讨成果107-109
致谢109