苦荞过敏原,Fagt1,Cupin超家族,美拉德反应,食品加工,

论文导读：疫苗。同时,解聚状态的Fagt1重组分子抗蛋白酶活性也显著下降。这些结果说明,11S种子储藏蛋白的抗酶解稳定性和免疫活性都依赖于其空间结构的完整性,设计实验改造Cupin食物过敏原的天然构象是降低其变应原性的有效对策。其次,本论文还就食品加工历程对苦荞过敏原免疫活性的影响进行了探讨。通过提取苦荞自身的多糖,探讨在多糖
摘要：苦荞作为一种药食同源的作物,具有很好的营养价值和保健作用。但是有报道苦荞可能引起过敏症状,如哮喘、皮炎等,而苦荞种子中的储藏蛋白被鉴定为苦荞主要过敏原。该蛋白属于Cupin家族的11S球蛋白,在苦荞种子中含量丰富,稳定性好。本论文主要以基因工程角度和食品加工角度对苦荞过敏原进行了探讨。本论文首先采取基因重组技术对苦荞过敏原Fag t1的核苷酸序列进行了重新构建,并将重组分子在原核载体中表达获得几种重组蛋白,分别命名为Fag t1-rs1, Fagt1-rs2,和Fagt1-rs3。这些重组蛋白由于失去天然蛋白特殊的结构而丧失了IgE结合活性,因而免疫活性显著降低。相比天然Fag t1,重组分子免疫活性降低了约90%,这些低敏分子有希望成为过敏特异性免疫治疗的疫苗。同时,解聚状态的Fagt1重组分子抗蛋白酶活性也显著下降。这些结果说明,11S种子储藏蛋白的抗酶解稳定性和免疫活性都依赖于其空间结构的完整性,设计实验改造Cupin食物过敏原的天然构象是降低其变应原性的有效对策。其次,本论文还就食品加工历程对苦荞过敏原免疫活性的影响进行了探讨。通过提取苦荞自身的多糖,探讨在多糖成分有着下,过敏蛋白发生的美拉德反应。结果表明,在70℃,3d条件下过敏蛋白与糖自发美拉德共价连接后,糖化蛋白在许多性质诸如,电泳性质,二级结构,溶解度及稳定性等都发生了转变。同时通过ELISA和免疫点杂交,利用患者血清和兔多抗对其免疫活性进行浅析,结果显示糖化蛋白IgE和IgG结合活性相比天然蛋白显著降低。我们推测过敏原与糖分子的结合转变了蛋白质的结构,尤其抗原表位发生了变化,导致过敏原活性显著降低。本实验结果提示,食品加工中的加热糖化历程可能会影响过敏活性。关键词：苦荞过敏原论文Fagt1论文Cupin超家族论文美拉德反应论文食品加工论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要12-13
ABSTRACT13-15
第一章 文献综述15-26

1.1 食物过敏的探讨进展15-19

1.1 食物过敏及其过敏原15-16

1.2 植物过敏原及其分类16-17

1.3 Cupin家族过敏原17-18

1.4 苦荞过敏原的探讨进展18-19

1.2 抗原特异性免疫治疗19-22

1.2.1 抗原特异性免疫治疗的机制19

1.2.2 疫苗和抗原表位19-20

1.2.3 重组过敏原的运用20-22

1.3 食品加工对过敏原的影响22-25

1.3.1 降低食物过敏的策略22-23

1.3.2 食品加工对免疫活性的影响23-24

1.3.3 美拉德反应与过敏原24-25

1.4 本探讨的目的和作用25-26

第二章 Fagt1低变应原性分子的构建26-34

2.1 材料26-27

2.

1.1 菌种及质粒26

2.

1.2 主要的工具酶及试剂26-27

2.

1.3 寡聚核苷酸引物27

2.2 策略27-29

2.1 过敏原Fagt1序列和二级结构浅析27

2.2 Fagt1的同源建模27-28

2.3 MHCⅡ类分子识别片段预测28

2.4 利用重叠PCR策略组建低变应原分子28-29

2.5 低变应原重组分子表达载体的构建29

2.3 结果29-32

2.3.1 过敏原Fagt1序列浅析和同源建模29-31

2.3.2 低变应原重组Fagt1分子的构建31-32

2.3.3 重组表达载体的构建32

2.4. 讨论32-34

第三章 低敏重组蛋白的表达,纯化及结构浅析34-41

3.1 材料34

3.

1.1 菌株及载体34

3.

1.2 主要的工具酶及试剂34

3.2 策略34-36
3.

2.1 重组质粒的诱导表达34-35

3.

2.2 表达产物的Ni~(2+)-NTA亲和层析纯化35

3.

2.3 SDS-PAGE35

3.

2.4 蛋白质浓度的测定35

3.

2.5 圆二色光谱浅析35-36

3.

2.6 目的蛋白的酶解及浅析36

3.

2.7 变性过敏蛋白的抗酶解性36

3.3 结果36-40

3.1 重组质粒的诱导表达36

3.2 目的蛋白的电泳浅析36-37

3.3 蛋白浓度测定37

3.4 圆二色光谱浅析37-38

3.5 目的蛋白对胃肠道酶的抗性浅析38-40

3.4 讨论40-41

第四章 重组蛋白的免疫活性鉴定41-49

4.1 材料41-42

4.

1.1 实验仪器和设备41

4.

1.2 实验材料和试剂41-42

4.2 策略42-44
4.

2.1 过敏蛋白Fagt1的表达和纯化42

4.

2.2 Fagt1多克隆抗体的制备42

4.

2.3 抗血清效价的检测42-43

4.

2.4 Western blot鉴定抗体特异性43

4.

2.5 ELISA43

4.

2.6 点杂交43-44

4.

2.7 Western blot鉴定44

4.3 结果44-47
4.

3.1 Fagt1多克隆抗体的效价检测44

4.

3.2 Fagt1多克隆抗体的Western blot浅析44-45

4.

3.3 ELISA检测Fagt1及其重组分子的免疫活性45

4.

3.4 点杂交检测Fagt1及其重组分子的免疫活性45-47

4.

3.5 Western blot检测Fagt1及其重组分子的免疫活性47

4.4 讨论47-49
第五章 美拉德反应对Fagt3免疫活性的影响49-58

5.1 实验材料,仪器及试剂49

5.2 策略49-51

5.

2.1 过敏原Fagt3提取及多糖制备49-50

5.

2.2 糖化蛋白的产生及电泳鉴定50

5.

2.3 Fagt3多抗的制备50

5.

2.4 免疫活性鉴定50

5.

2.5 圆二色光谱浅析50

5.

2.6 温度和pH稳定性浅析50-51

5.3 结果51-56
5.

3.1 多糖的分离提取51

5.

3.2 Fagt3及其糖化蛋白的纯化及鉴定51-53

5.

3.3 Fagt3糖化蛋白免疫活性浅析53-55

5.

3.4 温度和pH稳定性55-56

5.4 讨论56-58
参考文献58-65
攻读学位期间取得的探讨成果65-66
致谢66-67
个人简况及67-69