阐述表兄LPE对五种致龋菌生长及表兄链球菌相关酶活性影响选题

论文导读：溶性多糖(Waterinsolubleglucan,WIG)的含量,并对GTF活性与WIG含量的联系做相关性浅析。4.LPE对表兄链球菌乳酸脱氢酶活性和产酸的影响分组设计同上。采取还原性辅酶Ⅰ氧化法,测定LPE对表兄链球菌乳酸脱氢酶(Lactatedehydrogenase,LDH)活性的影响,同时用FE20实验室pH计测定用药前后培养液中pH值的变化(ΔpH=初始pH值—终
摘要：目的牙菌斑生物膜是龋病发生的基础。变异链球菌、表兄链球菌和内氏放线菌等是构成牙菌斑生物膜的主要致龋菌。细菌通过疏水作用吸附于牙釉质表面的获得性膜,利用葡糖基转移酶催化基质中的蔗糖合成葡聚糖,葡聚糖可诱导牙面上细菌的粘附和聚集,推动牙菌斑形成。牙菌斑中的细菌代谢产酸,主要是无氧酵解中乳酸脱氢酶催化丙酮酸生成乳酸,酸的累积造成牙釉质的局部脱矿,导致龋损形成。本课题组在国内外首先开展柠檬提取物(Lemon peel extract,LPE)防龋的系列探讨,LPE是由水果柠檬中提取的一种淡液体,主要成分是柠檬烯及其同分异构体(占总含量的79%)。本实验通过探讨LPE对5种致龋菌(变异链球菌、血链球菌、表兄链球菌、内氏放线菌、嗜酸乳杆菌)的生长抑制作用,对表兄链球菌致龋相关酶(葡糖基转移酶、乳酸脱氢酶)的活性及代谢产物(水不溶性多糖)的抑制作用,探讨LPE抑制口腔致龋菌生长,抑制表兄链球菌的附着性、代谢产酸的作用机制,同时浅析代谢酶在细菌致龋作用中的作用。策略1.LPE提取及成分浅析采取水蒸气蒸馏法提取挥发油,在一定的色谱质谱条件下,测得柠檬挥发油成分GC.MS总离子流色谱图(TIC)。根据检索NIST2008谱库,按峰面积归一化法进行定量,求得各组分的相对含量。2.LPE对五种口腔致龋菌生长的影响本实验选取变异链球菌、表兄链球菌、嗜酸乳杆菌、血链球菌、内氏放线菌为实验菌株,采取液体稀释法测定最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)；根据MIC实验结果,配置含LPE的TPY液体培养基。将菌悬液(1×108CFU/ml)与TPY液体培养基按体积比1：10比例接种,置于恒温细菌培养箱中37℃厌氧培养。分别于0h、0.5h、1h、2h、4h、6h、18h、24h提取菌液,采取菌落计数法检测LPE对五种细菌生长的影响。以活菌数(lgCFU/ml)为纵坐标,时间为横坐标,作图绘制生长曲线。3.LPE对表兄链球菌葡糖基转移酶活性和细胞外不溶性多糖含量的影响采取二倍稀释法,用TPY液体培养基将LPE稀释为2.25mg/ml、1.125mg/ml、0.563mg/ml和0.281mg/ml4个浓度的溶液(MIC为4.5mg/ml),以TPY液体培养基作为空白对照组。采取菌落计数法检测MIC以下四个浓度LPE对表兄链球菌生长曲线的影响。用Neson-Somogyi法测定培养6h、18h、24h和48h培养液中还原糖的含量,计算出葡糖基转移酶(Glucosyltranerase, GTF)活性；采取蒽酮法测定水不溶性多糖(Water insoluble glucan, WIG)的含量,并对GTF活性与WIG含量的联系做相关性浅析。4.LPE对表兄链球菌乳酸脱氢酶活性和产酸的影响分组设计同上。采取还原性辅酶Ⅰ氧化法,测定LPE对表兄链球菌乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)活性的影响,同时用FE20实验室pH计测定用药前后培养液中pH值的变化(ΔpH=初始pH值—终末pH值),以检测LPE对表兄链球菌产酸能力的抑制作用,并对LDH活性和细菌代谢产酸能力的联系做相关性浅析。结果1.以柠檬提取物气相色谱-质谱总离子流色谱图(TIC)中,共检测出100余个色谱峰,鉴定了其中的40个色谱峰,其含量占挥发油总量的93.954%。主要成分是柠檬烯,β-蒎烯,4-皆烯等。2.LPE对五种口腔致龋菌的MIC分别是：变异链球菌、血链球菌、表兄链球菌的MIC为4.5mg/ml,嗜酸乳杆菌和内氏放线菌的MIC为2.25mg/ml。在致龋菌的MIC作用下,以0.5h到24h,随作用时间延长,实验组菌量逐渐减少。选取0、0.5h、1h、2h四个时点,对各菌组的实验组与空白对照组进行重复测量方差浅析,变异链球菌、血链球菌、内氏放线菌、嗜酸乳杆菌、表兄链球菌的实验组与空白组比较,差别有统计学作用(p0.05)3.菌落计数法测量MIC以下四个浓度LPE对表兄链球菌生长的影响。以0.281mg/ml组到2.25mg/ml组,随着LPE溶液浓度的升高,在0h、0.5h、1h、2h、4h、6h、18h、24h、48h,与空白对照组比较,LPE对表兄链球菌的生长有抑制作用。在同一时间点,随着LPE溶液浓度的升高,表论文导读：ΔpH的总体均数在四个时间点间比较,差别均无统计学作用(P0.05)。乳酸脱氢酶活性和△pH值之间呈正相关(r=0.926～0.982)。结论1.本探讨提取并利用的LPE,主要成分以烯类化合物为主,占总含量79%,主要有：柠檬烯(48%)、β-蒎烯(17%)等。2.LPE对变异链球菌(MI.5mg/ml)、血链球菌(MI.5mg/ml)、表兄链球菌(MI.5mg/ml).内氏放线菌
兄链球菌的GTF活性及胞外WIG含量逐渐降低,除低浓度组0.563mg/ml和0.281mg/ml外,各组还原糖量及酶活性均数间比较,差别均有统计学作用(P0.01)；各浓度组与空白对照组GTF活性及WIG均数之间比较,差别均有统计学作用(P0.01)；同一浓度下,各时间点(48h除外)(浓度组—空白对照组)酶活性与WIG含量的总体均数比较,差别均有统计学作用(P0.01),空白对照组酶活性的总体均数在6h、18h与24h间比较,差别均无统计学作用(P0.05)。空白对照组WIG含量的总体均数在4个时间点比较,差别均无统计学作用(P0.05)。GTF活性和WIG含量之间呈正相关(r=0.865～0.94)。4.在同一时间点,随着LPE溶液浓度的升高,以0.281mg/ml组到2.25mg/ml组,LDH活性和ΔpH逐渐降低,各实验组均数间比较,差别有统计学作用(P0.01),各实验组与空白对照组酶活性、ApH比较,差别均有统计学作用(P0.01)；同一浓度下,各时间点,(浓度组—空白对照组)乳酸脱氢酶活性和ΔpH的总体均数在四个时间点间比较,差别均无统计学作用(P0.05)。乳酸脱氢酶活性和△pH值之间呈正相关(r=0.926～0.982)。结论1.本探讨提取并利用的LPE,主要成分以烯类化合物为主,占总含量79%,主要有：柠檬烯(48%)、β-蒎烯(17%)等。2.LPE对变异链球菌(MI.5mg/ml)、血链球菌(MI.5mg/ml)、表兄链球菌(MI.5mg/ml).内氏放线菌(MIC2.5mg/ml)、嗜酸乳杆菌(MIC2.5mg/ml)的生长有抑制作用。3.LPE在MIC以下四个浓度,以0.281mg/ml至2.25mg/ml,对表兄链球菌GTF和WIG的合成均具有抑制作用,随着药物浓度的升高,抑制作用增强。4.LPE在MIC以下四个浓度,以0.281mg/ml至2.25mg/ml,对表兄链球菌LDH活性及影响糖代谢产酸能力均具有抑制作用,随着药物浓度的升高,抑制作用增强。5.LPE对表兄链球菌GTF和WIG合成的抑制作用最佳时间段为18h～24h。6.LPE在低于MIC以下的四个浓度(0.281mg/m、0.563mg/m、1.125mg/m、2.25mg/ml),也可有效抑制GTF及LDH活性,减少WIG的合成及产酸量,但不会影响菌群数目变化。关键词：LPE论文表兄链球菌论文口腔致龋菌论文细胞外多糖论文葡糖基转移酶论文乳酸论文脱氢酶论文
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Abstract7-13
缩略语13-14
前言14-18
探讨近况、成果14-16
探讨目的、策略16-18

一、LPE对口腔主要致龋菌生长的影响18-23

1.1 对象和策略18-20

1.1 材料与仪器18

1.2 实验菌种和培养基18

1.3 菌液制备18-19

1.4 LPE的提取和成分浅析19

1.4.1 LPE提取策略19

1.4.2 LPE成分浅析19

1.5 LPE最低抑菌浓度19

1.6 菌落计数法测量LPE对五种口腔致龋菌生长的影响19-20

1.7 统计策略20

1.2 结果20-21

1.2.1 LPE成分GC-MS总离子流色谱图及浅析结果20

1.2.2 LPE对各菌的最低抑菌浓度MIC值20

1.2.3 五种致龋菌在各时间点的1gCFU/ml值20-21

1.3 讨论21-22

1.4 小结22-23

二、LPE对表兄链球菌葡糖基转移酶活性和细胞外多糖含量的影响23-30

2.1 对象和策略23-26
2.

1.1 材料与仪器23

2.

1.2 主要试剂的配制23-24

2.

1.3 LPE对表兄链球菌生长的影响24

2.

1.4 GTF与WIG菌液培养及实验分组24-25

2.

1.4.1 实验菌株及菌液制备24-25

2.

1.4.2 LPE溶液的稀释及实验分组25

2.

1.4.3 表兄链球菌菌液培养25

2.

1.5 葡萄糖标准曲线和葡聚糖标准曲线的测定25

2.

1.5.1 葡萄糖标准曲线测定25

2.

1.5.2 葡聚糖标准曲线测定25

2.1.6 G论文导读：.1.6LPE溶液对表兄链球菌产酸能力的影响313.1.7统计学处理313.2结果31-323.2.1LPE溶液对表兄链球菌LDH影响323.2.2LPE溶液对表兄链球菌产酸能力影响323.2.3LPE溶液对表兄链球菌LDH活性与△pH影响的相关性浅析323.3结论32-343.4小结34-35结论35-36参考文献36-41附录41-55发表论文和参加科研情况说明55-56综述56-68综述
TF的提取和活性测定25-26
2.

1.7 胞外WIG含量的测定26

2.

1.8 统计学处理26

2.2 结果26-27

2.1 LPE对表兄链球菌生长的影响26

2.2 葡萄糖标准曲线和葡聚糖标准曲线测定26-27

2.3 LPE溶液对表兄链球菌胞外WIG含量影响的测定27

2.4 LPE溶液对表兄链球菌GTF活性与WIG含量影响的相关性浅析27

2.3 讨论27-29

2.4 小结29-30

三、LPE对表兄链球菌的乳酸脱氢酶活性和产酸能力的影响30-35

3.1 对象与策略30-31

3.

1.1 材料与仪器30

3.

1.2 实验菌株及菌液制备30

3.

1.3 LPE溶液的稀释及实验分组30-31

3.

1.4 菌液培养31

3.

1.5 LPE溶液对表兄链球菌LDH的影响31

3.

1.6 LPE溶液对表兄链球菌产酸能力的影响31

3.

1.7 统计学处理31

3.2 结果31-32
3.

2.1 LPE溶液对表兄链球菌LDH影响32

3.

2.2 LPE溶液对表兄链球菌产酸能力影响32

3.

2.3 LPE溶液对表兄链球菌LDH活性与△pH影响的相关性浅析32

3.3 结论32-34

3.4 小结34-35

结论35-36
参考文献36-41
附录41-55
发表论文和参加科研情况说明55-56
综述56-68
综述参考文献63-68
致谢68