试议白头翁白头翁质量评价与五环三萜皂苷类成分药物代谢动力学
最后更新时间：2024-04-04
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论文导读：单、快速的HPLC-ESI-MS法同时定量测定白头翁药材中9种化学成分。在对其进行定性探讨中,利用HPLC-ESI-MS/MS联用技术浅析探讨了8个五环三萜皂苷类化合物的特点碎片离子,推测其电喷雾质谱裂解规律,最终在白头翁提取物中推导出了37个五环三萜皂苷化合物的结构。在药代动力学探讨中,首次建立了一种灵敏的、可靠的多次切换监测方式
摘要：白头翁(Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel)是毛莨科植物白头翁的干燥根,主要分布于亚洲、欧洲和北美洲等地区。白头翁具有清热解毒、凉血止痢的功效,临床上被广泛用于阿米巴性痢疾、疟疾、滴虫、细菌感染和恶性肿瘤等疾病的治疗。近年来,由于白头翁药材具有显著的抗肿瘤作用而越来越被广泛关注。故本课题对白头翁药材进行了系统地分离、质量评价和药物代谢动力学探讨。本实验采取大孔吸附树脂法,硅胶柱色谱法、葡聚糖凝胶和反相柱色谱法对白头翁药材进行系统分离,并建立了一个简单、快速的HPLC-ESI-MS法同时定量测定白头翁药材中9种化学成分。在对其进行定性探讨中,利用HPLC-ESI-MS/MS联用技术浅析探讨了8个五环三萜皂苷类化合物的特点碎片离子,推测其电喷雾质谱裂解规律,最终在白头翁提取物中推导出了37个五环三萜皂苷化合物的结构。在药代动力学探讨中,首次建立了一种灵敏的、可靠的多次切换监测方式HPLC-MS策略同时测定大鼠灌胃给予白头翁提取物后大鼠血浆中4种三萜皂苷的含量,并运用于药代动力学探讨。首次对大鼠口服白头翁提取物后胆汁中6种五环三萜皂苷类化合物进行浅析测定,并对这些三萜皂苷的胆汁排泄轮廓进行探讨。综上对白头翁药材的系统探讨将为其进一步开发运用提供全面的论述依据。第一部分白头翁化学成分探讨目的：探讨药材白头翁(Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel)中的化学成分。策略：取粉碎后的白头翁约10kg,用70%乙醇冷浸提取3次,采取AB-8大孔吸附树脂进行分离,收集70%乙醇洗脱液部分,得浸膏(总苷)约500g。采取大孔吸附树脂法,硅胶柱色谱法、葡聚糖凝胶和反相柱色谱法对白头翁药材进行系统分离,并用波谱和化学策略鉴定化合物的结构。结果：以白头翁的70%乙醇提取物中分离得到9个单体化合物,对其进行了结构鉴定,其中包括5个五环三萜皂苷,2个三萜酸,2个甾酮类化合物。分别鉴定为齐墩果酸、白头翁皂苷A3、白头翁皂苷B4、23-羟基白桦脂酸、刺人参皂苷S、白头翁皂苷B、白头翁皂苷C、筋骨草甾酮C和p-蜕皮甾酮。结论：以白头翁中分离鉴定了9个化合物,其中3个化合物为首次以该植物中发现,分别为刺人参皂苷S,筋骨草甾酮C和p-蜕皮甾酮。第二部分液质联用技术同时测定白头翁中9种化学成分及其质量表征目的：建立HPLC-MS法测定论文导读：si,全程氮气通入状态。扫描方式采取多重反应监测(MRM)；碰撞气(CAD,N2)压力为medium;Q1和Q3分辨率均为UNIT。结果：峰面积与浓度呈良好的线性联系(r20.9948)；日内和日间精密度分别小于2.78%和2.68%,并运用于20批次不同来源白头翁药材的含量测定。结论：本探讨中建立的浅析策略灵敏度高、专属性好,可为白头翁药材质量制约提供一个
白头翁中白头翁皂苷B4(1),白头翁皂苷A3(2),23-羟基白桦脂酸(3),刺人参苷S(4),白头翁皂苷C(5),白头翁皂苷B(6),齐墩果酸(7),p-蜕皮甾酮(8)和筋骨草甾酮C(9)含量的策略。策略：采取Sapphire C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相：A(甲醇含0.1%甲酸)-B(0.1%甲酸水溶液),梯度洗脱程序为0-6min(75%-95%A),6-14min(95%A),随后回到最初75%A并持续到21min；流速为0.8mL.min-1。采取电喷雾离子源进行正离子和负离子方式检测,多反应监测方式(MRM)用于定量测定。正离子监测方式下源喷射电压设置为5500V；负离子监测方式下源喷射电压设置为-4500V；离子源温度为650℃。雾化气(Gas1):40psi,加热气(Gas2):50psi,接口持续加热,帘气25psi,全程氮气通入状态。扫描方式采取多重反应监测(MRM)；碰撞气(CAD,N2)压力为medium;Q1和Q3分辨率均为UNIT。结果：峰面积与浓度呈良好的线性联系(r20.9948)；日内和日间精密度分别小于2.78%和2.68%,并运用于20批次不同来源白头翁药材的含量测定。结论：本探讨中建立的浅析策略灵敏度高、专属性好,可为白头翁药材质量制约提供一个强有力的工具。有助于规范白头翁药材的质量,并能够在一定程度上指导中医临床用药的合理性。第三部分液质联用技术定性鉴定白头翁中五环三萜皂苷类成分目的：对白头翁进行超声提取后即进行HPLC-MS浅析,探讨8个五环三萜皂苷类化合物的特点碎片离子,推测其电喷雾质谱裂解规律,再将此规律运用于白头翁中未知羽扇豆烷型和齐墩果烷型三萜皂苷类化合物的结构推测,根据已知裂解规律尽可能多的推测出白头翁中五环三萜皂苷的化学结构。策略：采取了MRM-IDA-EPI和PREC-IDA-EPI两种方式浅析未知五环三萜皂苷类化合物。取白头翁药材粉末(40目)5g,加70%甲醇25mL,称重,冰浴超声提取1h,称重,用70%甲醇补足减失的重量,0.45μm微孔滤膜滤过,滤液减压蒸干,残渣用2mL的70%甲醇溶解,0.45μm微孔滤膜滤过,进行HPLC-MS浅析。色谱柱为Sapphire C18(250mm×4.6mm,5μm),采取0.1%甲酸甲醇(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱75-7论文导读：为白头翁皂苷B4,白头翁皂苷C,23-羟基羽扇R-20(29)-烯-28-酸-3-O-28-O-,白头翁皂苷B,23-羟基羽扇豆-20(29)-烯-28-酸-3-O--28-O-,常春藤皂苷元28-0-,白头翁皂苷A3和常春藤皂苷。同时,通过由对照品裂解行为总结得出的规律推断出了29个五环三萜皂苷类化合物的结构。结论：本实验首次建立了利用HPLC-ESI-MS联用技术浅析白头翁中五
5%A (0-15min);75-80%A (15-30min);80-95%A (30-40min);95-95%A (40-50min),流速为700μL·min-1。质谱：ESI源；负离子检测源电压-4500V；正离子检测源电压5500V；源温度(TEM)：650。C；雾化气(gas1):40psi,加热气(gas2):50psi,帘气(CUR)：25psi。结果：通过与对照品的保留时间、分子量和质谱数据比较,分别对8个已知五环三萜化合物色谱峰进行归属。化合物6,10,14,18,20,21,35和36分别鉴定为白头翁皂苷B4,白头翁皂苷C,23-羟基羽扇R-20(29)-烯-28-酸-3-O-[吡喃鼠李糖基-吡喃阿拉伯糖基]28-O-[吡喃葡萄糖酯苷],白头翁皂苷B,23-羟基羽扇豆-20(29)-烯-28-酸-3-O-[吡喃阿拉伯糖基]-28-O-[呲喃葡萄糖酯苷],常春藤皂苷元28-0-[吡喃葡萄糖基-吡喃葡萄糖酯苷],白头翁皂苷A3和常春藤皂苷。同时,通过由对照品裂解行为总结得出的规律推断出了29个五环三萜皂苷类化合物的结构。结论：本实验首次建立了利用HPLC-ESI-MS联用技术浅析白头翁中五环三萜皂苷类成分的策略。本法灵敏度高、专属性强,成功用于白头翁中五环三萜皂苷类化合物的结构鉴定。通过联合MRM-IDA-EPI和PREC-IDA-EPI扫描方式对化合物结构浅析方面具有显著优越性,对制约中药材质量具有重要作用。第四部分HPLC-MS法同时测定大鼠血浆中4种五环三萜皂苷类成分及其药物代谢动力学探讨目的：建立HPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中白头翁提取物4个五环三萜皂苷类化合物(白头翁皂苷B4,白头翁皂苷B,白头翁皂苷A3和23-羟基白桦脂酸)的浅析策略,并计算其在大鼠体内的药动学参数。策略：血浆样品采取了Strata-X固相萃取柱预处理,采取Sapphire C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱；以A(甲醇含0.1%甲酸)-B(0.1%甲酸水溶液)为流动相,梯度洗脱程序为：0-6min,75-95%A;6-15min,保持95%A不变,预平衡时间为6min,流速为800μL·min-1。色谱柱后溶液全部进入离子源,无分流,浅析时间为15min。质谱以电喷雾离子源进行正离子方式和负离子方式检测,采取多反应监测方式,并首次运用了多次切换检论文导读：
测方式。白头翁皂苷B4,白头翁皂苷B,白头翁皂苷A3,23-羟基白桦脂酸和内标的监测离子对分别为m/z1219.7/749.4, m/z819.4/347.2, m/z749.6/471.2, m/z471.4/471.4和m/z461.1/285.0。本探讨将4种五环三萜皂苷类成分和内标化合物的检测历程划分为5个阶段：0.0-6.998min,内标和白头翁皂苷B4在负离子方式下监测；6.998-7.028min,负离子扫描方式被切换至正离子扫描方式；7.028-10.027min,正离子方式下监测白头翁皂苷B；10.027-10.057min,正离子扫描方式被切换至负离子扫描方式；10.057-15.059min,负离子方式下监测白头翁皂苷A3和23-羟基白桦脂酸。结果：4种五环三萜皂苷类成分在大鼠血浆中专属性、线性、准确度、精密度、提取回收率和基质回收率均被验证。4种待测化合物的线性联系良好(r20.99)；日内、日间精密度的相对标准偏差(RSD)均小于9%；在室温储存24h,5次冻融和-20。C储存30天的条件下各待测化合物的稳定性良好,准确度在-6.82%-6.18%之间；高、中、低三个浓度水平的平均提取回收率分别为82.16%-104.5%；基质效应均值在77.69%-108.2%之间。结论：该策略特异、快速、灵敏,结合固相萃取的预处理策略和HPLC-MS的新检测手段对白头翁中4种五环三萜皂苷类化合物进行了药物代谢动力学探讨。本探讨中首次运用了多次切换检测方式,并首次在五环三萜皂苷类化合物体内测定时采取了Strata-X固相小柱进行生物样品预处理。此策略为五环三萜皂苷类化合物的药物代谢动力学探讨提供了一个新的思路。第五部分液质联用技术测定大鼠胆汁中6种五环三萜皂苷类成分及其排泄动力学探讨目的：建立一种可同时测定大鼠胆汁中6种主要五环三萜皂苷类化合物(白头翁皂苷B4,刺人参苷S,白头翁皂苷C,白头翁皂苷B,白头翁皂苷A3和23-羟基白桦脂酸)含量的HPLC-MS策略,并用于大鼠灌胃给予白头翁提取物后其6种待测化合物的胆汁排泄动力学探讨。策略：色谱柱为Sapphire-C18柱(250mm×4.6mm,5μm);柱温为25℃;流动相为(0.1%甲酸)甲醇A-0.1%甲酸水溶液B,梯度洗脱,洗脱程序如下：0.0-6.0min,75-95%A;6.0-15.0mi论文导读：喷雾离子源(ESI源),TurboV离子源,源温度为650℃。源喷射电压为5500V和-4500V,源内气体1(Gas1,N2)压力：40psi；气体2(Gas2,N2)压力：50psi；气帘气体(N2)压力：25psi；正负离子分别检测方式；扫描方式为多重反应监测(MRM)；碰撞气(CAD,N2)压力为medium;Q1分辨率为UNIT,Q3分辨率为UNIT.SD大鼠8只,随机分成2组。其中2只为空白对照
n,保持95%A；进样前预平衡6min。流速为800μL·min-1。色谱柱后溶液全部进入离子源,无分流,进样量为10μL。电喷雾离子源(ESI源),Turbo V离子源,源温度为650℃。源喷射电压为5500V和-4500V,源内气体1(Gas1, N2)压力：40psi；气体2(Gas2, N2)压力：50psi；气帘气体(N2)压力：25psi；正负离子分别检测方式；扫描方式为多重反应监测(MRM)；碰撞气(CAD,N2)压力为medium; Q1分辨率为UNIT, Q3分辨率为UNIT. SD大鼠8只,随机分成2组。其中2只为空白对照组,实验组6只大鼠灌胃给予白头翁提取物(10mL·kg-1)后,收集给药后0-1h,1-3h,3-5h,5-7h,7-9h,9-12h和12-24h时间段的胆汁并测定体积。测定大鼠灌胃给予白头翁提取物后胆汁中6种五环三萜皂苷类化合物的累积排泄率。结果：大鼠胆汁中内源性物质不干扰6种待测化合物和内标的测定；6种五环三萜皂苷类成分标准曲线的相联系数(r2)均大于0.9973；日内RSD和日间RSD分别小于9.1%和9.0%,RE在-9.5%到9.2%之间；提取回收率的范围为80.03%～115.6%；基质效应的范围为78.43%-109.7%。结论：该策略简便、快速、灵敏度高、专属性强,可满足大鼠胆汁中微量五环三萜类皂苷成分的测定要求。待测6种五环三萜皂苷类化合物在1-3h内排泄率最高,在3-5h时间段时略有减少,随着时间的推移,排泄率逐渐降低,并趋于平缓。结果表明,只有不到14%的待测物以原型以胆汁排泄,结果表明其五环三萜皂苷类化合物在体内可能有着某种生物转化和体内代谢。第六部分白桦脂酸血浆蛋白结合率测定目的：建立白桦脂酸在大鼠血浆、人血浆和牛血清白蛋白中蛋白结合率的测定策略。策略：采取平衡透析法测定白桦脂酸血浆蛋白结合率,利用HPLC法测定血浆中白桦脂酸浓度,测定并比较不同血浆中白桦脂酸的血浆蛋白结合率。结果：在50～100μg/mL,药物浓度对血浆蛋白结合率无显著影响,白桦脂酸与大鼠和人的血浆蛋白结合率有着显著性差别,白桦脂酸与人血浆蛋白结合率高于与大鼠血浆蛋白结合率。结论：白桦脂酸与血浆蛋白具有较强的结合,且在实验设计的浓度范围内蛋白结合率与透析液中药物浓度无关。只有少量游离药物作为活性药物分子参与体内药物处置,以而产生药理论文导读：
效应。第七部分白桦脂酸大鼠在体肠吸收动力学探讨目的：建立同时测定肠循环液中白桦脂酸和酚红浓度的HPLC-DAD法,并探讨白桦脂酸在大鼠各肠段的吸收动力学特点及不同药物浓度对吸收的影响。策略：采取大鼠在体肠吸收实验模型,并考察吸收部位、药物浓度和pH值对药物吸收的影响。色谱柱为Diamonsil ODS C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%乙酸(75:25)；流速1.0mL.min-1;柱温30℃；检测波长203nm(白桦脂酸)和430nm(酚红)；进样量20μL。结果：在75～125μg·mL-1内白桦脂酸的吸收速率与质量浓度呈线性联系,Ka值基本保持不变；各肠段的吸收速率无显著性差别,十二指肠、空肠.回肠和结肠的Ka值分别为(0.151±0.0049),(0.156±0.0056),(0.149±0.0083),(0.159±0.0041)h-1。结论：白桦脂酸在小肠中吸收良好,没有特定吸收部位；不同浓度对白桦脂酸在大鼠全肠道的吸收无显著影响,其在肠道的吸收呈一级吸收动力学特点,吸收机制为被动扩散。白桦脂酸是难溶性药物,可以通过增加药物的溶出度,进而提升药物的生物利用度。关键词：HPLC-MS法论文白头翁论文五环三萜皂苷论文质量评价论文药物代谢动力学论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要6-12
英文摘要12-20
英文缩写20-22
引言22-24
第一部分 白头翁化学成分探讨24-56
前言24
材料与策略24-26
结果26-34
附图34-54
讨论54
小结54-55
参考文献55-56
第二部分 液质联用技术同时测定白头翁中9种化学成分及其质量表征56-74
前言56
材料与策略56-59
结果59-61
附图61-65
附表65-71
讨论71-72
小结72
参考文献72-74
第三部分 液质联用技术定性鉴定白头翁中五环三萜皂苷类成分74-111
前言74-75
材料与策略75-77
结果77-94
附图94-107
附表107-109
讨论109
小结109
参考文献109-111
第四部分 HPLC-MS法同时测定大鼠血浆中4种五环三萜皂苷类成分及其药物代谢动力学探讨111-134论文导读：附表173-175讨论175小结175-176参考文献176-177结论177-179综述白头翁化学成分和药理作用探讨进展179-188参考文献185-188致谢188-189个人简历189-191上一页1234567
前言111-112
材料与策略112-116
结果116-119
附图119-127
附表127-130
讨论130-131
小结131
参考文献131-134
第五部分 液质联用技术测定大鼠胆汁中6种五环三萜皂苷类成分及其排泄动力学探讨134-150
前言134
材料与策略134-138
结果138-141
附图141-145
附表145-148
讨论148
小结148-149
参考文献149-150
第六部分 白桦脂酸血浆蛋白结合率测定150-164
前言150
材料与策略150-154
结果154-156
附图156-160
附表160-162
讨论162
小结162-163
参考文献163-164
第七部分 白桦脂酸大鼠在体肠吸收动力学探讨164-177
前言164
材料与策略164-167
结果167-169
附图169-173
附表173-175
讨论175
小结175-176
参考文献176-177
结论177-179
综述 白头翁化学成分和药理作用探讨进展179-188
参考文献185-188
致谢188-189
个人简历189-191
摘要：白头翁(Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel)是毛莨科植物白头翁的干燥根,主要分布于亚洲、欧洲和北美洲等地区。白头翁具有清热解毒、凉血止痢的功效,临床上被广泛用于阿米巴性痢疾、疟疾、滴虫、细菌感染和恶性肿瘤等疾病的治疗。近年来,由于白头翁药材具有显著的抗肿瘤作用而越来越被广泛关注。故本课题对白头翁药材进行了系统地分离、质量评价和药物代谢动力学探讨。本实验采取大孔吸附树脂法,硅胶柱色谱法、葡聚糖凝胶和反相柱色谱法对白头翁药材进行系统分离,并建立了一个简单、快速的HPLC-ESI-MS法同时定量测定白头翁药材中9种化学成分。在对其进行定性探讨中,利用HPLC-ESI-MS/MS联用技术浅析探讨了8个五环三萜皂苷类化合物的特点碎片离子,推测其电喷雾质谱裂解规律,最终在白头翁提取物中推导出了37个五环三萜皂苷化合物的结构。在药代动力学探讨中,首次建立了一种灵敏的、可靠的多次切换监测方式HPLC-MS策略同时测定大鼠灌胃给予白头翁提取物后大鼠血浆中4种三萜皂苷的含量,并运用于药代动力学探讨。首次对大鼠口服白头翁提取物后胆汁中6种五环三萜皂苷类化合物进行浅析测定,并对这些三萜皂苷的胆汁排泄轮廓进行探讨。综上对白头翁药材的系统探讨将为其进一步开发运用提供全面的论述依据。第一部分白头翁化学成分探讨目的：探讨药材白头翁(Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel)中的化学成分。策略：取粉碎后的白头翁约10kg,用70%乙醇冷浸提取3次,采取AB-8大孔吸附树脂进行分离,收集70%乙醇洗脱液部分,得浸膏(总苷)约500g。采取大孔吸附树脂法,硅胶柱色谱法、葡聚糖凝胶和反相柱色谱法对白头翁药材进行系统分离,并用波谱和化学策略鉴定化合物的结构。结果：以白头翁的70%乙醇提取物中分离得到9个单体化合物,对其进行了结构鉴定,其中包括5个五环三萜皂苷,2个三萜酸,2个甾酮类化合物。分别鉴定为齐墩果酸、白头翁皂苷A3、白头翁皂苷B4、23-羟基白桦脂酸、刺人参皂苷S、白头翁皂苷B、白头翁皂苷C、筋骨草甾酮C和p-蜕皮甾酮。结论：以白头翁中分离鉴定了9个化合物,其中3个化合物为首次以该植物中发现,分别为刺人参皂苷S,筋骨草甾酮C和p-蜕皮甾酮。第二部分液质联用技术同时测定白头翁中9种化学成分及其质量表征目的：建立HPLC-MS法测定论文导读：si,全程氮气通入状态。扫描方式采取多重反应监测(MRM)；碰撞气(CAD,N2)压力为medium;Q1和Q3分辨率均为UNIT。结果：峰面积与浓度呈良好的线性联系(r20.9948)；日内和日间精密度分别小于2.78%和2.68%,并运用于20批次不同来源白头翁药材的含量测定。结论：本探讨中建立的浅析策略灵敏度高、专属性好,可为白头翁药材质量制约提供一个
白头翁中白头翁皂苷B4(1),白头翁皂苷A3(2),23-羟基白桦脂酸(3),刺人参苷S(4),白头翁皂苷C(5),白头翁皂苷B(6),齐墩果酸(7),p-蜕皮甾酮(8)和筋骨草甾酮C(9)含量的策略。策略：采取Sapphire C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相：A(甲醇含0.1%甲酸)-B(0.1%甲酸水溶液),梯度洗脱程序为0-6min(75%-95%A),6-14min(95%A),随后回到最初75%A并持续到21min；流速为0.8mL.min-1。采取电喷雾离子源进行正离子和负离子方式检测,多反应监测方式(MRM)用于定量测定。正离子监测方式下源喷射电压设置为5500V；负离子监测方式下源喷射电压设置为-4500V；离子源温度为650℃。雾化气(Gas1):40psi,加热气(Gas2):50psi,接口持续加热,帘气25psi,全程氮气通入状态。扫描方式采取多重反应监测(MRM)；碰撞气(CAD,N2)压力为medium;Q1和Q3分辨率均为UNIT。结果：峰面积与浓度呈良好的线性联系(r20.9948)；日内和日间精密度分别小于2.78%和2.68%,并运用于20批次不同来源白头翁药材的含量测定。结论：本探讨中建立的浅析策略灵敏度高、专属性好,可为白头翁药材质量制约提供一个强有力的工具。有助于规范白头翁药材的质量,并能够在一定程度上指导中医临床用药的合理性。第三部分液质联用技术定性鉴定白头翁中五环三萜皂苷类成分目的：对白头翁进行超声提取后即进行HPLC-MS浅析,探讨8个五环三萜皂苷类化合物的特点碎片离子,推测其电喷雾质谱裂解规律,再将此规律运用于白头翁中未知羽扇豆烷型和齐墩果烷型三萜皂苷类化合物的结构推测,根据已知裂解规律尽可能多的推测出白头翁中五环三萜皂苷的化学结构。策略：采取了MRM-IDA-EPI和PREC-IDA-EPI两种方式浅析未知五环三萜皂苷类化合物。取白头翁药材粉末(40目)5g,加70%甲醇25mL,称重,冰浴超声提取1h,称重,用70%甲醇补足减失的重量,0.45μm微孔滤膜滤过,滤液减压蒸干,残渣用2mL的70%甲醇溶解,0.45μm微孔滤膜滤过,进行HPLC-MS浅析。色谱柱为Sapphire C18(250mm×4.6mm,5μm),采取0.1%甲酸甲醇(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱75-7论文导读：为白头翁皂苷B4,白头翁皂苷C,23-羟基羽扇R-20(29)-烯-28-酸-3-O-28-O-,白头翁皂苷B,23-羟基羽扇豆-20(29)-烯-28-酸-3-O--28-O-,常春藤皂苷元28-0-,白头翁皂苷A3和常春藤皂苷。同时,通过由对照品裂解行为总结得出的规律推断出了29个五环三萜皂苷类化合物的结构。结论：本实验首次建立了利用HPLC-ESI-MS联用技术浅析白头翁中五
5%A (0-15min);75-80%A (15-30min);80-95%A (30-40min);95-95%A (40-50min),流速为700μL·min-1。质谱：ESI源；负离子检测源电压-4500V；正离子检测源电压5500V；源温度(TEM)：650。C；雾化气(gas1):40psi,加热气(gas2):50psi,帘气(CUR)：25psi。结果：通过与对照品的保留时间、分子量和质谱数据比较,分别对8个已知五环三萜化合物色谱峰进行归属。化合物6,10,14,18,20,21,35和36分别鉴定为白头翁皂苷B4,白头翁皂苷C,23-羟基羽扇R-20(29)-烯-28-酸-3-O-[吡喃鼠李糖基-吡喃阿拉伯糖基]28-O-[吡喃葡萄糖酯苷],白头翁皂苷B,23-羟基羽扇豆-20(29)-烯-28-酸-3-O-[吡喃阿拉伯糖基]-28-O-[呲喃葡萄糖酯苷],常春藤皂苷元28-0-[吡喃葡萄糖基-吡喃葡萄糖酯苷],白头翁皂苷A3和常春藤皂苷。同时,通过由对照品裂解行为总结得出的规律推断出了29个五环三萜皂苷类化合物的结构。结论：本实验首次建立了利用HPLC-ESI-MS联用技术浅析白头翁中五环三萜皂苷类成分的策略。本法灵敏度高、专属性强,成功用于白头翁中五环三萜皂苷类化合物的结构鉴定。通过联合MRM-IDA-EPI和PREC-IDA-EPI扫描方式对化合物结构浅析方面具有显著优越性,对制约中药材质量具有重要作用。第四部分HPLC-MS法同时测定大鼠血浆中4种五环三萜皂苷类成分及其药物代谢动力学探讨目的：建立HPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中白头翁提取物4个五环三萜皂苷类化合物(白头翁皂苷B4,白头翁皂苷B,白头翁皂苷A3和23-羟基白桦脂酸)的浅析策略,并计算其在大鼠体内的药动学参数。策略：血浆样品采取了Strata-X固相萃取柱预处理,采取Sapphire C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱；以A(甲醇含0.1%甲酸)-B(0.1%甲酸水溶液)为流动相,梯度洗脱程序为：0-6min,75-95%A;6-15min,保持95%A不变,预平衡时间为6min,流速为800μL·min-1。色谱柱后溶液全部进入离子源,无分流,浅析时间为15min。质谱以电喷雾离子源进行正离子方式和负离子方式检测,采取多反应监测方式,并首次运用了多次切换检论文导读：
测方式。白头翁皂苷B4,白头翁皂苷B,白头翁皂苷A3,23-羟基白桦脂酸和内标的监测离子对分别为m/z1219.7/749.4, m/z819.4/347.2, m/z749.6/471.2, m/z471.4/471.4和m/z461.1/285.0。本探讨将4种五环三萜皂苷类成分和内标化合物的检测历程划分为5个阶段：0.0-6.998min,内标和白头翁皂苷B4在负离子方式下监测；6.998-7.028min,负离子扫描方式被切换至正离子扫描方式；7.028-10.027min,正离子方式下监测白头翁皂苷B；10.027-10.057min,正离子扫描方式被切换至负离子扫描方式；10.057-15.059min,负离子方式下监测白头翁皂苷A3和23-羟基白桦脂酸。结果：4种五环三萜皂苷类成分在大鼠血浆中专属性、线性、准确度、精密度、提取回收率和基质回收率均被验证。4种待测化合物的线性联系良好(r20.99)；日内、日间精密度的相对标准偏差(RSD)均小于9%；在室温储存24h,5次冻融和-20。C储存30天的条件下各待测化合物的稳定性良好,准确度在-6.82%-6.18%之间；高、中、低三个浓度水平的平均提取回收率分别为82.16%-104.5%；基质效应均值在77.69%-108.2%之间。结论：该策略特异、快速、灵敏,结合固相萃取的预处理策略和HPLC-MS的新检测手段对白头翁中4种五环三萜皂苷类化合物进行了药物代谢动力学探讨。本探讨中首次运用了多次切换检测方式,并首次在五环三萜皂苷类化合物体内测定时采取了Strata-X固相小柱进行生物样品预处理。此策略为五环三萜皂苷类化合物的药物代谢动力学探讨提供了一个新的思路。第五部分液质联用技术测定大鼠胆汁中6种五环三萜皂苷类成分及其排泄动力学探讨目的：建立一种可同时测定大鼠胆汁中6种主要五环三萜皂苷类化合物(白头翁皂苷B4,刺人参苷S,白头翁皂苷C,白头翁皂苷B,白头翁皂苷A3和23-羟基白桦脂酸)含量的HPLC-MS策略,并用于大鼠灌胃给予白头翁提取物后其6种待测化合物的胆汁排泄动力学探讨。策略：色谱柱为Sapphire-C18柱(250mm×4.6mm,5μm);柱温为25℃;流动相为(0.1%甲酸)甲醇A-0.1%甲酸水溶液B,梯度洗脱,洗脱程序如下：0.0-6.0min,75-95%A;6.0-15.0mi论文导读：喷雾离子源(ESI源),TurboV离子源,源温度为650℃。源喷射电压为5500V和-4500V,源内气体1(Gas1,N2)压力：40psi；气体2(Gas2,N2)压力：50psi；气帘气体(N2)压力：25psi；正负离子分别检测方式；扫描方式为多重反应监测(MRM)；碰撞气(CAD,N2)压力为medium;Q1分辨率为UNIT,Q3分辨率为UNIT.SD大鼠8只,随机分成2组。其中2只为空白对照
n,保持95%A；进样前预平衡6min。流速为800μL·min-1。色谱柱后溶液全部进入离子源,无分流,进样量为10μL。电喷雾离子源(ESI源),Turbo V离子源,源温度为650℃。源喷射电压为5500V和-4500V,源内气体1(Gas1, N2)压力：40psi；气体2(Gas2, N2)压力：50psi；气帘气体(N2)压力：25psi；正负离子分别检测方式；扫描方式为多重反应监测(MRM)；碰撞气(CAD,N2)压力为medium; Q1分辨率为UNIT, Q3分辨率为UNIT. SD大鼠8只,随机分成2组。其中2只为空白对照组,实验组6只大鼠灌胃给予白头翁提取物(10mL·kg-1)后,收集给药后0-1h,1-3h,3-5h,5-7h,7-9h,9-12h和12-24h时间段的胆汁并测定体积。测定大鼠灌胃给予白头翁提取物后胆汁中6种五环三萜皂苷类化合物的累积排泄率。结果：大鼠胆汁中内源性物质不干扰6种待测化合物和内标的测定；6种五环三萜皂苷类成分标准曲线的相联系数(r2)均大于0.9973；日内RSD和日间RSD分别小于9.1%和9.0%,RE在-9.5%到9.2%之间；提取回收率的范围为80.03%～115.6%；基质效应的范围为78.43%-109.7%。结论：该策略简便、快速、灵敏度高、专属性强,可满足大鼠胆汁中微量五环三萜类皂苷成分的测定要求。待测6种五环三萜皂苷类化合物在1-3h内排泄率最高,在3-5h时间段时略有减少,随着时间的推移,排泄率逐渐降低,并趋于平缓。结果表明,只有不到14%的待测物以原型以胆汁排泄,结果表明其五环三萜皂苷类化合物在体内可能有着某种生物转化和体内代谢。第六部分白桦脂酸血浆蛋白结合率测定目的：建立白桦脂酸在大鼠血浆、人血浆和牛血清白蛋白中蛋白结合率的测定策略。策略：采取平衡透析法测定白桦脂酸血浆蛋白结合率,利用HPLC法测定血浆中白桦脂酸浓度,测定并比较不同血浆中白桦脂酸的血浆蛋白结合率。结果：在50～100μg/mL,药物浓度对血浆蛋白结合率无显著影响,白桦脂酸与大鼠和人的血浆蛋白结合率有着显著性差别,白桦脂酸与人血浆蛋白结合率高于与大鼠血浆蛋白结合率。结论：白桦脂酸与血浆蛋白具有较强的结合,且在实验设计的浓度范围内蛋白结合率与透析液中药物浓度无关。只有少量游离药物作为活性药物分子参与体内药物处置,以而产生药理论文导读：
效应。第七部分白桦脂酸大鼠在体肠吸收动力学探讨目的：建立同时测定肠循环液中白桦脂酸和酚红浓度的HPLC-DAD法,并探讨白桦脂酸在大鼠各肠段的吸收动力学特点及不同药物浓度对吸收的影响。策略：采取大鼠在体肠吸收实验模型,并考察吸收部位、药物浓度和pH值对药物吸收的影响。色谱柱为Diamonsil ODS C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%乙酸(75:25)；流速1.0mL.min-1;柱温30℃；检测波长203nm(白桦脂酸)和430nm(酚红)；进样量20μL。结果：在75～125μg·mL-1内白桦脂酸的吸收速率与质量浓度呈线性联系,Ka值基本保持不变；各肠段的吸收速率无显著性差别,十二指肠、空肠.回肠和结肠的Ka值分别为(0.151±0.0049),(0.156±0.0056),(0.149±0.0083),(0.159±0.0041)h-1。结论：白桦脂酸在小肠中吸收良好,没有特定吸收部位；不同浓度对白桦脂酸在大鼠全肠道的吸收无显著影响,其在肠道的吸收呈一级吸收动力学特点,吸收机制为被动扩散。白桦脂酸是难溶性药物,可以通过增加药物的溶出度,进而提升药物的生物利用度。关键词：HPLC-MS法论文白头翁论文五环三萜皂苷论文质量评价论文药物代谢动力学论文
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英文摘要12-20
英文缩写20-22
引言22-24
第一部分 白头翁化学成分探讨24-56
前言24
材料与策略24-26
结果26-34
附图34-54
讨论54
小结54-55
参考文献55-56
第二部分 液质联用技术同时测定白头翁中9种化学成分及其质量表征56-74
前言56
材料与策略56-59
结果59-61
附图61-65
附表65-71
讨论71-72
小结72
参考文献72-74
第三部分 液质联用技术定性鉴定白头翁中五环三萜皂苷类成分74-111
前言74-75
材料与策略75-77
结果77-94
附图94-107
附表107-109
讨论109
小结109
参考文献109-111
第四部分 HPLC-MS法同时测定大鼠血浆中4种五环三萜皂苷类成分及其药物代谢动力学探讨111-134论文导读：附表173-175讨论175小结175-176参考文献176-177结论177-179综述白头翁化学成分和药理作用探讨进展179-188参考文献185-188致谢188-189个人简历189-191上一页1234567
前言111-112
材料与策略112-116
结果116-119
附图119-127
附表127-130
讨论130-131
小结131
参考文献131-134
第五部分 液质联用技术测定大鼠胆汁中6种五环三萜皂苷类成分及其排泄动力学探讨134-150
前言134
材料与策略134-138
结果138-141
附图141-145
附表145-148
讨论148
小结148-149
参考文献149-150
第六部分 白桦脂酸血浆蛋白结合率测定150-164
前言150
材料与策略150-154
结果154-156
附图156-160
附表160-162
讨论162
小结162-163
参考文献163-164
第七部分 白桦脂酸大鼠在体肠吸收动力学探讨164-177
前言164
材料与策略164-167
结果167-169
附图169-173
附表173-175
讨论175
小结175-176
参考文献176-177
结论177-179
综述 白头翁化学成分和药理作用探讨进展179-188
参考文献185-188
致谢188-189
个人简历189-191