试述细胞消栓通络方有效成分组药代动力学及作用机制

论文导读：
摘要：中药复方有效成分组是指临床确证有效的中药方剂中所含有的与功能主治相关的全部有效成分的有机组合。这种有机组合,一是有效成分的有机组合,二是有效成分在主治适应症发病和治疗历程中作用靶点的有机组合,即药物的整体作用。中药复方的作用机制实际上是两个复杂系统的相互作用,即药物有效成分组成的复杂物质系统和病理条件下药物作用靶点组成的复杂生物系统。正是由于这两个复杂系统的相互作用才达到了药物治疗疾病的目的。而中药有效成分组这一概念的引入,可以更好地描述这两个复杂系统的相互作用,使中药复方的探讨更符合中药组方的论述。中药复方有效成分组探讨,主要包括以下内容：1.复方与相关高通量筛选模型的确定与建立。有效成分组的探讨是建立在有效方剂的基础上进行的探讨,首先需要确定复方的有效性；在此基础上,根据复方的适应症,结合现代药理学的原理,选择与复方适应症联系密切的靶点并建立相关的筛选模型,用于评价中药复方成分的活性。2.样品制备。采取化学的技术策略,将中药复方中的化学成分进行分离制备,获得分离的中药复方的总成分,样品的制备可以采取柱层析的策略获得连续样品,也可以采取其他策略获得样品,但需要注意的是各样品要有确定的特点和成分,以便后期根据其样品信息进行组合。3.活性筛选和综合评价。在样品制备和模型建立的基础上,进行多种模型的筛选,然后针对每一个样品在多个模型上的活性体现进行综合浅析,确定作为有效成分组的组成成分的依据。经过对样品活性的浅析和活性样品的综合浅析,确定有效成分组的组成。4.有效成分组成分鉴定和有效成分组的制备工艺探讨。重点解决有效成分组大规模制备的工艺不足,通过工艺探讨,获得与实验组合和论述浅析基本相符的有效成分组物质组合。通过药效评价验证和成分鉴定,确定合适的制备工艺,获得符合要求的中药复方有效成分组。5.有效成分组质量标准探讨。用于制约有效成分组的质量。6.有效成分组临床前探讨。重点探讨体内药物代谢动力学,药效学以及药物作用机制。通过探讨,完成对中药复方的开发。消栓通络方临床上主要用于预防和治疗脑中风及其后遗症,疗效确切,是本实验室运用有效成分组学论述进行系统探讨的中药方剂之一。本课题在前期探讨成果的基础上,探讨了消栓通络方有效成分组(Effective Components Group of Xiaoshuantongluo, XECG)的药代动力学特点、药理学作用、发挥论文导读：
作用的主要物质基础及可能的作用机制。一、消栓通络方有效成分组的质量探讨和药代动力学探讨本论文首先建立了消栓通络方中各味药材主要活性成分的超高效液相-串联四级杆质谱策略,可同时检测18种化学成分：原儿茶醛、川芎嗪、阿魏酸、牡荆素、金丝桃苷、芦丁、槲皮素、三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rgl、木香烃内酯、姜黄素、芒柄花素、人参皂苷Rb1、黄芪甲苷、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA。并将该策略运用于中药复方及有效成分组的质量制约。本探讨建立的超高效液相-串联四级杆质谱策略以Waters ACQUITY UPLCTMBEH C18(2.1mm×100mm,1.7μm)色谱柱进行分离,甲醇-0.1%甲酸溶液梯度洗脱,多反应监测(MRM)方式测定,离子化方式选择ESI+,ESI-。结果显示,18种活性成分测定的线性范围在1.0-500.0ng/ml之间,r值在0.9896-0.9996之间,高、中、低3个水平日内、日间精密度RSD均15%,室温24h稳定性RSD15%(除三七皂苷R1外)。在8名健康志愿者体内进行的消栓通络片(Xiaoshuantongluo Tablet, XSTL)人体药代动力学探讨结果显示,本实验原定检测的18种化合物,仅有人参皂苷Rgl、三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb14种化合物在人体内有极低的血药浓度,其它14种化合物在各个时间点均未检测到。在大鼠体内进行的XECG和XSTL的药代动力学结果显示,XECG与XSTL相比,在给药剂量保持原药材量一致的情况下,黄酮苷类物质金丝桃苷、芦丁的吸收显著增加,三萜皂苷类物质人参皂苷Rgl、三七皂苷R1、人参皂苷Rbl的生物利用度显著提升,酚酸类成分阿魏酸的吸收和利用也显著增高,但黄酮苷元芒柄花素的吸收相比较差。结果提示,有效成分组可以更好的推动多种成分的吸收,比目前临床运用的片剂吸收程度和吸收速度都有显著的增加,可能是有效成分组能够更好地反映复方作用的基础。二、消栓通络片有效成分组抗血栓形成的作用及机制探讨为全面评价XECG在血栓性疾病治疗中的作用,本课题选择三氯化铁诱导的大鼠颈总动脉血栓模型、下腔静脉结扎造成的大鼠静脉血栓模型、肾上腺素联合冰水浴引起的大鼠急性血瘀模型和胶原蛋白联合肾上腺素诱导的小鼠急性肺栓塞模型,观察了XECG对血栓形成的影响,结果显示,XECG可不同程度的抑制血栓形成,且作用大多论文导读：挥作用的物质基础,我们在体外进行了相关实验,结果表明XECG具有良好的DPPH自由基能力和脑线粒体脂质过氧化保护作用,并可通过其抗氧化活性抑制AGEs的生成。在DPPH清除实验中,槲皮素、芦丁、原儿茶醛、阿魏酸、姜黄素、丹酚酸B显示了较强的自由基清除能力；在脑线粒体脂质过氧化实验中,槲皮素、原儿茶醛、姜黄素、丹酚酸B保护作
都优于原方XSTL。在三氯化铁诱导的大鼠颈总动脉血栓模型中,XECG能够显著延长血流阻断时间(TTO),延缓血栓形成。在大鼠下腔静脉结扎模型中,预防运用XECG后,血栓湿重大幅降低。虽然在急性血瘀模型中,XECG对血液流变学中全血粘度、血浆粘度、红细胞聚集率等无影响,但却显著降低血小板聚集率,降低血浆中TXA2和D-dimer的含量。而在小鼠急性肺栓塞模型中,可能由于XECG给药剂量过小,仅观察到其对翻正反射消失时间有显著延长作用,对小鼠死亡时间无影响。XECG灌胃给药能抑制ADP诱导的血小板聚集,作用强度与ASP相当,说明抑制血小板聚集可能是XECG抑制血栓形成的主要作用机制之一。XECG可延长APTT、PT和TT,表明其对凝血系统内源性和外源性两条凝血途径均有抑制作用,且其作用强度适中,引起出血的可能性较小,但XECG对凝血系统相关指标的影响在不同的模型中稍有差别,可能与模型对这些指标影响的基础状态不同有关。XECG对机体的氧化还原系统也有较为显著的影响,预防运用后能显著升高脑组织和血浆中SOD活力,显著降低血浆中MDA含量,对脑组织MDA水平也有降低的走势。动物口服XECG后,血浆中NO含量显著下降,脑组织和血浆中GSH水平略有升高。针对XECG的抗氧化活性及其发挥作用的物质基础,我们在体外进行了相关实验,结果表明XECG具有良好的DPPH自由基能力和脑线粒体脂质过氧化保护作用,并可通过其抗氧化活性抑制AGEs的生成。在DPPH清除实验中,槲皮素、芦丁、原儿茶醛、阿魏酸、姜黄素、丹酚酸B显示了较强的自由基清除能力；在脑线粒体脂质过氧化实验中,槲皮素、原儿茶醛、姜黄素、丹酚酸B保护作用最强：而在AGEs生成抑制实验中,结果也非常相似,丹酚酸B、槲皮素、芦丁及原儿茶醛活性最好。有效成分组中含有的单体成分人参皂苷Re、人参皂苷Rgl、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、芦丁体外抗血小板聚集作用较强,可能是XECG抗血小板聚集活性的主要物质基础。以上结果说明,XECG可以通过多个环节多个靶点对血栓发生进展的历程进行干预,以而共同发挥抗血栓形成的作用。抗血小板聚集、影响凝血系统功能、保护机体免受氧化应激损伤都可能是其抗血栓形成的作用机制。三、消栓通络方有效成分组对血管功能的影响及机制探讨各种理由引起的血管功能异常是血栓性疾病发生进展的重要因素之一。本课题通过离体胸主动脉舒张实验、内皮论文导读：123456789下一页
细胞氧化损伤实验及血管平滑肌细胞增殖实验对消栓通络方及其活性化合物进行了全面的比较和评价。通过离体血管环实验,发现XECG可剂量依赖性的舒张NE和高钾预收缩的血管,作用强于原方XSTL,其作用部分依赖于血管内皮功能,激活NO-cGMP通路；部分作用不依赖于血管内皮,而是通过直接阻滞血管平滑肌细胞上的钙离子通道发挥作用；还可以通过抑制VC表型转化而降低VC的收缩功能。但是,实验发现XECG预孵育可提升血管对收缩物质的敏感性,使低浓度NE引起的收缩加强,但高浓度NE引起的最大收缩幅度降低,Western Blot的结果证明后者可能与eNOS的活性增强和表达升高有关,而与ROCK1无关。根据以上结果,可以认为XECG对血管功能的影响重在调节,而不是简单的对刺激因素引起的收缩发挥抑制作用,其具体的机制有待于进一步探讨。在对单体化合物的探讨中发现,对NE预收缩血管,丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、桂皮醛、肉桂酸、黄芪甲苷、芒柄花素舒张血管的作用较强,但对高钾预收缩的血管,仅芒柄花素、槲皮素、阿魏酸和姜黄素显示出较强的血管舒张作用。以上化合物可能是XECG舒张血管的物质基础,但不同化合物发挥作用的机制可能不同。在进行单体化合物舒张血管作用评价的同时,本论文对NE和高钾预收缩血管舒张作用均较强的芒柄花素进行了进一步的机制探讨。结果表明,芒柄花素是一个多靶点作用的化合物,其舒张血管的效应部分依赖于内皮,通过激活NO通路发挥作用；部分不依赖于内皮,通过直接开放血管平滑肌细胞上的钾离子通道和阻滞钙离子通道发挥作用。另外,芒柄花素也可通过抑制VC表型转化而降低VC的收缩功能。内皮细胞氧化损伤保护实验结果表明,XECG可保护内皮细胞免受氧化损伤,抑制内皮细胞凋亡,降低其与中性粒细胞的粘附；单体化合物中阿魏酸、槲皮素、肉桂酸、黄芪甲苷保护作用较强,可能是XECG保护内皮细胞免受氧化损伤的主要物质基础。XECG对VC增殖有较好的抑制作用,单体化合物槲皮素、丹酚酸B、原儿茶醛和芦丁体现出良好的抑制活性,人参皂苷Rbl、人参皂苷Re、人参皂苷Rgl、黄芪甲苷、川芎嗪、牡荆素、桂皮醛、肉桂酸也具有一定的作用,上面陈述的化合物可能是XECG抑制VC增殖的物质基础。综上,我们认为XECG对血管功能的影响主要是调节血管舒缩能力、保护内皮细胞和抑制血管平滑肌增殖,以上方面均有利于XE论文导读：栓通络方中药材功效及主要成分探讨18-192消栓通络方的药理作用及临床运用19-21第二节中药复方有效成分组的概念与探讨方式21-261复方与相关高通量筛选模型的确定与建立21-222样品制备22-233活性筛选和综合浅析234有效成分组药效评价23-245有效成分组作用机制的综合浅析24-256有效成分组成分鉴定与质量探讨257有效成
CG发挥抗血栓形成的作用。关键词：中药复方有效成分组论文血栓形成论文血小板聚集论文凝血论文血瘀论文氧化应激论文内皮细胞论文平滑肌细胞论文糖基化终末产物论文脂质过氧化论文自由基清除论文血管舒张论文药代动力学论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要9-13
ABSTRACT13-18
第一章 消栓通络方有效成分组探讨概述18-30
第一节 消栓通络方探讨概况18-21
1 消栓通络方中药材功效及主要成分探讨18-19
2 消栓通络方的药理作用及临床运用19-21
第二节 中药复方有效成分组的概念与探讨方式21-26
1 复方与相关高通量筛选模型的确定与建立21-22
2 样品制备22-23
3 活性筛选和综合浅析23
4 有效成分组药效评价23-24
5 有效成分组作用机制的综合浅析24-25
6 有效成分组成分鉴定与质量探讨25
7 有效成分组体内药物代谢动力学探讨25-26
8 有效成分组制剂和安全性评价26
第三节 本课题拟解决的主要科学不足和主要探讨内容26-28
1 有效成分组的全面质量制约和药代动力学探讨的策略学不足27
2 中药方剂功能主治的药理学基础及药效评价27
3 有效成分组的物质基础和作用机制27-28
4 “君、臣、佐、使”的现代药理学认识及有效成分组再优化的可能性28
参考文献28-30
第二章 消栓通络方有效成分组药代动力学探讨30-61
前言30-32
第一节 消栓通络方有效成分组UPLC-MS/MS检测策略学探讨及确证32-42
1 实验材料32-33
2 实验策略33-34

2.1 对照品储备液的制备33

2.2 供试品溶液的制备33

2.3 标准曲线的制备33

2.4 精密度实验33-34

2.5 稳定性实验34

3 实验结果34-41

3.1 检测条件的确定和优化34-37

3.2 标准曲线及线性范围37-38

3.3 日内、日间精密度结果38

3.4 稳定性实验结果38-39

3.5 四种消栓通络方制剂的检测结果39-40

3.6 有效成分组和消栓通络片成分比较40-41

4 讨论41-42
第二节 消栓通络片的人体药代动力学试验42-48
1 试验材料42
2 试验策略42-43

2.1 入选标准论文导读：

42-43

2.2 取血点设计43

2.3 血样处理43

2.4 标准曲线的配制43

2.5 回收率试验43

2.6 数据统计43

3 试验结果43-46

3.1 血浆标准曲线及线性范围43-44

3.2 回收率试验结果44-45

3.3 人体药代动力学试验结果45-46

4 讨论46-47
5 小结47-48
第三节 消栓通络方有效成分组和消栓通络片大鼠体内药代动力学探讨48-57
1 实验材料48
2 实验策略48-49

2.1 给药剂量的确定48-49

2.2 取血点设计49

2.3 数据统计49

3 实验结果49-54

3.1 XECG在大鼠体内的药代动力学结果49-53

3.2 XSTL在大鼠体内的药代动力学结果53-54

4 讨论54-56
5 小结56-57
第四节 讨论57-59
参考文献59-61
第三章 消栓通络方有效成分组对实验性血栓形成的作用61-124
第一节 消栓通络方有效成分组对三氯化铁诱导大鼠颈总动脉血栓模型的影响62-77
前言62
1 实验材料62-63
2 实验策略63-66

2.1 三氯化铁诱导的大鼠颈总动脉血栓模型的建立63-64

2.2 分组及给药64

2.3 观察指标64-66

2.4 数据统计66

3 实验结果66-72

3.1 XECG对血栓形成时间的影响66

3.2 XECG对ADP诱导的血小板聚集的影响66-67

3.3 XECG对凝血四项的影响67-68

3.4 XECG对生化指标的影响68-72

4 讨论72-75
5 小结75
参考文献75-77
第二节 消栓通络方有效成分组对大鼠下腔静脉结扎血栓模型的影响77-84
前言77
1 实验材料77-78
2 实验策略78-79

2.1 大鼠下腔静脉结扎血栓模型的建立78

2.2 分组及给药78

2.3 观察指标78-79

2.4 数据统计79

3. 实验结果79-81

3.1 XECG对血栓湿重的影响79-80

3.2 XECG对ADP诱导的血小板聚集的影响80

3.3 XECG对凝血指标的影响80-81

4 讨论81-82
5 小结82
参考文献82-84
第三节 消栓通络方有效成分组对大鼠急性血瘀模型的影响84-92
前言84
1 实验材料84-85
2 实验策略85-86

2.1 大鼠急性血瘀模型的建立85

2.2 分组及给药85

2.3 观察指标85-86

2.4 数据统计86

3 实验结果86-89

3.1 XECG对急性血瘀大鼠全血粘度和血浆粘度的影响86-87

3.2 XECG论文导读：33实验结果113-1154讨论115-1165小结116参考文献116-118第八节讨论118-124参考文献121-124第四章消栓通络方有效成分组对血管功能的影响及作用机制探讨124-164第一节消栓通络方有效成分组及活性化合物舒张血管的作用及机制探讨125-1491XECG舒张血管的作用及其机制探讨125-135上一页123456789下一页
对急性血瘀大鼠红细胞聚集的影响87

3.3 XECG对急性血瘀大鼠血小板聚集的影响87-88

3.4 XECG对急性血瘀大鼠凝血功能的影响88

3.5 XECG对急性血瘀大鼠血浆中6-Keto-PGF_(1α)、TXB_2和D-dimer的影响88-89
4 讨论89-90
5 小结90
参考文献90-92
第四节 消栓通络方有效成分组对胶原蛋白诱导的小鼠急性肺栓塞模型的影响92-96
前言92
1 实验材料92-93
2 实验策略93

2.1 胶原蛋白诱导的小鼠急性肺栓塞模型的建立93

2.2 分组及给药93

2.3 数据统计93

3 实验结果93-94

3.1 死亡率93

3.2 翻正反射消失时间93

3.3 死亡时间93-94

4 讨论94
5 小结94-95
参考文献95-96
第五节 消栓通络方有效成分组及活性化合物体外抗血小板聚集作用探讨96-102
1 实验材料97
2 实验策略97-98

2.1 血小板的制备97-98

2.2 体外血小板聚集实验98

3 实验结果98-100
4 讨论100-101
5 小结101
参考文献101-102
第六节 消栓通络方有效成分组及活性化合物体外抗氧化活性探讨102-111
1 消栓通络方有效成分组及活性化合物体外自由基清除实验102-106

1.1 实验材料103

1.2 实验策略103

1.3 实验结果103-106

2 消栓通络方有效成分组及活性化合物抗线粒体脂质过氧化实验106-109

2.1 实验材料106

2.2 实验策略106-107

2.1 大鼠脑线粒体提取策略106-107

2.2 半胱氨酸-Fe~(2+)反应系统诱导脑线粒体脂质过氧化107

2.3 实验结果107-109

3 讨论109
4 小结109-110
参考文献110-111
第七节 消栓通络方有效成分组及活性化合物抗蛋白质非酶糖基化作用探讨111-118
1 实验材料112
2 实验策略112-113

2.1 溶液配制112

2.2 AGEs生成模型的制备112

2.3 实验步骤112-113

3 实验结果113-115
4 讨论115-116
5 小结116
参考文献116-118
第八节 讨论118-124
参考文献121-124
第四章 消栓通络方有效成分组对血管功能的影响及作用机制探讨124-164
第一节 消栓通络方有效成分组及活性化合物舒张血管的作用及机制探讨125-149
1 XECG舒张血管的作用及其机制探讨125-135论文导读：

1.1 实验材料125-126

1.2 实验策略126-129

1.3 实验结果129-135

1.3.1 XECG对NE和KCl预收缩大鼠胸主动脉的舒张作用129-130

1.3.2 XECG对NE和KCl收缩大鼠胸主动脉的抑制作用130-131

1.3.3 XECG舒张血管的作用与内皮的联系131-132

1.3.4 XECG舒张血管的作用与钾离子通道的联系132

1.3.5 XECG对无钙高钾KH液中CaCl_2收缩效应的影响132-133

1.3.6 XECG对无钙KH液中NE收缩效应的影响133

1.3.7 XECG对血管平滑肌细胞表型转化的影响133-134

1.3.8 XECG对血管p-eNOS、eNOS、p-MLC、MLC、ROCK1表达的影响134-135
2 XECG中活性化合物舒张血管作用比较135-137

2.1 实验材料135

2.2 实验策略135

2.3 实验结果135-137

2.3.1 活性化合物对KCl预收缩大鼠胸主动脉的舒张作用135-136

2.3.2 活性化合物对NE预收缩大鼠胸主动脉的舒张作用136-137

3 芒柄花素舒张血管的作用及其机制探讨137-143

3.1 实验材料138

3.2 实验策略138-139

3.3 实验结果139-143

3.1 芒柄花素对NE和KCl预收缩大鼠胸主动脉的舒张作用139

3.2 芒柄花素对NE和KCl收缩大鼠胸主动脉的抑制作用139-140

3.3 芒柄花素舒张血管的作用与内皮的联系140-141

3.4 芒柄花素舒张血管的作用与钾离子通道的联系141-142

3.5 XECG对无钙高钾KH液中CaCl_2收缩效应的影响142-143

3.6 芒柄花素对无钙KH液中NE收缩效应的影响143

3.7 芒柄花素对血管平滑肌细胞表型转化的影响143

4 讨论143-146

4.1 XECG舒张血管的作用及其可能机制143-145

4.2 XECG中单体化合物舒血管活性评价145

4.3 芒柄花素舒张血管的作用及其可能机制145-146

参考文献146-149
第二节 消栓通络方有效成分组及活性化合物对血管内皮细胞损伤的保护作用149-157
1 实验材料149-150
2 实验策略150-151

2.1 过氧化氢损伤模型的建立150

2.2 药物处理150-151

2.3 数据统计151

3 实验结果151-154
3.1 H_2O_2对论文导读：参考文献160-162第四节讨论162-164第五章消栓通络方有效成分组的探讨及全文总结164-1781前期探讨成果164-1661.1消栓通络方有效成分组抗动脉粥样硬化作用1641.2消栓通络方有效成分组抗血栓形成作用164-1651.3消栓通络方有效成分组对缺血性脑血管疾病的防治作用165-1661.4消栓通络方有效成分组药代动力学探讨1662本论
CRL-1730细胞存活率的影响151

3.2 H_2O_2对CRL-1730细胞形态学的影响151-152

3.3 XECG及其活性化合物对内皮细胞抗化损伤的保护作用152-154

4 讨论154-155
5 小结155
参考文献155-157
第三节 消栓通络方有效成分组对血管平滑肌细胞增殖的影响157-162
1 实验材料157
2 实验策略157-158

2.1 血管平滑肌细胞的培养157-158

2.2 药物处理及活力检测158

3 实验结果158-160
4 讨论160
5 小结160
参考文献160-162
第四节 讨论162-164
第五章 消栓通络方有效成分组的探讨及全文总结164-178
1 前期探讨成果164-166

1.1 消栓通络方有效成分组抗动脉粥样硬化作用164

1.2 消栓通络方有效成分组抗血栓形成作用164-165

1.3 消栓通络方有效成分组对缺血性脑血管疾病的防治作用165-166

1.4 消栓通络方有效成分组药代动力学探讨166

2 本论文主要探讨内容166-169

2.1 消栓通络方质量制约及药代动力学探讨166-167

2.2 消栓通络方有效成分组活血化瘀作用及其机制探讨167-168

2.3 消栓通络方有效成分组活血化瘀的物质基础探讨168-169

3 结果浅析169-176

3.1 有效成分组学运用于中药复方探讨的优势169-170

3.2 XECG活血化瘀的作用机制170-171

3.3 “君、臣、佐、使”的现代药理学认识171-175

3.4 有效成分组再优化的可能性175-176

4 结语与展望176-177
参考文献177-178
综述：中药复方药动学探讨进展178-187
参考文献185-187
附录

1. 缩略词表(ABBREVIATIONS)187-189

附录2 消栓通络方中主要单体化合物化学结构式及来源189-192
个人简历192-194
致谢194-196