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探讨蛇足石杉中石杉碱甲和石杉碱乙分离纯化-集

最后更新时间:2024-03-23 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:5243 浏览:13365
论文导读:谱检测HupA和HupB的流动相条件:0.1%TFA,18%甲醇,1mL/min,该策略快速、准确,证实了不同产地蛇足石杉中的含量差别。探讨发现添加改性剂可以有效改善HupA和HupB的分离,减少拖尾,酸改性剂对流动相pH的调节作用对保留时间和分离度有很大影响,三氟乙酸(TFA)是最佳的酸改性剂。

2、比较了传统浸提、超声提取和闪式提取法提取HupA和H

摘要:石杉碱甲(Huperzine A,HupA)是草药蛇足石杉中有着的天然生物碱,是一种强效、可逆性的乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChE inhibitor),可以用于治疗阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease,AD)和其他记忆障碍病症,由此成为探讨人员关注的热点。与石杉碱甲结构相似的石杉碱乙(Huperzine B,HupB)也具有一定的乙酰胆碱酯酶抑制活性,天然石杉碱甲和石杉碱乙及以其骨架来合成的类似物被大量用于药理、药效和临床探讨。然而,石杉碱甲和石杉碱乙在石杉科植物中含量很低,药源植物资源的匮乏已成为进展新型药物的瓶颈。科学利用有限的植物资源非常重要,为此本探讨目的是开发一种快速和低成本的HupA和HupB分离纯化工艺,对不同提取和纯化的策略进行比较,建立一套精确的检测和分离策略,并对其中关键的改性剂进行了探讨,最后对反相制备色谱分离进行了优化。此外,本探讨还进行了对蛇足石杉内生真菌的筛选和初步活性探讨。1、确定了高效液相色谱检测HupA和HupB的流动相条件:0.1%TFA,18%甲醇,1mL/min,该策略快速、准确,证实了不同产地蛇足石杉中的含量差别。探讨发现添加改性剂可以有效改善HupA和HupB的分离,减少拖尾,酸改性剂对流动相pH的调节作用对保留时间和分离度有很大影响,三氟乙酸(TFA)是最佳的酸改性剂。2、比较了传统浸提、超声提取和闪式提取法提取HupA和HupB的效果,初步纯化用树脂法和萃取法的差别。超声提取得率可达75%,操作简单易放大,更加适合工业生产;较之于其他树脂,弱极性大孔树脂SP850吸附解吸效果最好,可以有效浓缩提取液100倍以上,HupA和HupB回收率都在90%以上。3、优化了制备色谱分离HupA和HupB的进样量和流速,最佳条件:0.1%TFA,流速8mL/min,上样量40mg,同时得到HupA和HupB纯度均在98%以上,总回收率分别为83%和81.8%。4、以安徽黄山、福建三明的蛇足石杉植株中分离出52株内生真菌。用75%乙醇浸泡3min,15%次氯酸钠处理15-18min可以达到最好的消毒效果,分离得到的青霉属内生真菌可能产生抑菌性物质和石杉生物碱类物质。关键词:石杉碱甲论文石杉碱乙论文蛇足石杉论文分离纯化论文制备色谱论文三氟乙酸论文内生真菌论文
本论文导读:生物碱分离纯化的进展23-281.3.1中药和天然活性产物23-241.3.2天然产物分离纯化的技术特点241.3.3生物碱分离纯化的策略24-271.3.3.1生物碱分离纯化的一般策略24-251.3.3.2生物碱分离纯化的新策略25-271.3.4石杉碱甲和石杉碱乙的纯化分离27-281.4植物内生真菌及其代谢活性的探讨28-291.

4.1植物内生真菌的定义281.2

论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要4-6
Abstract6-19
第一章 文献综述19-31

1.1 蛇足石杉19-20

1.1 蛇足石杉的植物学分类和形态特点19

1.2 蛇足石杉分布和生境19-20

1.3 蛇足石杉的资源和繁育探讨20

1.2 石杉碱甲和石杉碱乙20-23

1.2.1 石松生物碱20

1.2.2 石杉碱甲和石杉碱乙的化学结构性质20-21

1.2.3 石杉碱甲的药理作用21-22

1.2.3.1 胆碱脂酶的抑制作用21

1.2.3.2 作用于脑内神经递质和胆碱能受体21

1.2.3.3 抗氧化作用21

1.2.3.4 抗凋亡作用21-22

1.2.4 石杉碱甲的临床运用探讨22

1.2.4.1 治疗老年痴呆症 AD22

1.2.4.2 治疗血管性痴呆 VD22

1.2.4.3 改善记忆功能和精神恢复治疗22

1.2.5 石杉碱乙的药理作用22

1.2.6 石杉碱甲和石杉碱乙的来源22-23

1.2.6.1 天然植物来源23

1.2.6.2 化学合成来源23

1.2.6.3 新来源的探讨进展23

1.3 生物碱分离纯化的进展23-28

1.3.1 中药和天然活性产物23-24

1.3.2 天然产物分离纯化的技术特点24

1.3.3 生物碱分离纯化的策略24-27

1.3.3.1 生物碱分离纯化的一般策略24-25

1.3.3.2 生物碱分离纯化的新策略25-27

1.3.4 石杉碱甲和石杉碱乙的纯化分离27-28

1.4 植物内生真菌及其代谢活性的探讨28-29

1.4.1 植物内生真菌的定义28

1.4.2 内生真菌产活性化合物的发现和机理28

1.4.3 产石杉碱甲内生真菌的探讨进展28-29

1.5 选题的立意和探讨策略29-31

1.5.1 选题的作用29-30

1.5.2 探讨策略和内容30-31

第二章 石杉碱甲和石杉碱乙的检测策略的建立31-43

2.1 实验材料和仪器31

2.

1.1 实验仪器31

2.

1.2 实验材料31

2.2 实验策略31-40

2.1 液相色谱检测条件31-32

2.2 流动相条件的确定32-36

2.1 标准母液的配置32

2.2 流动相溶剂的选择32

2.3 流动相改性剂的选择32-36

2.3 标准曲线的确立36-论文导读:

37

2.3.1 标准曲线36-37

2.3.2 精密度实验37

2.3.3 加样回收率实验37

2.4 定量检测石杉碱甲和石杉碱乙37-40

2.4.1 定量检测石杉碱甲和石杉碱乙的条件和策略37

2.4.2 样品的制备37

2.4.3 不同产地蛇足石杉原料中石杉碱甲和石杉碱乙的定量检测37-40

2.3 本章小结40-43

第三章 石杉碱甲和石杉碱乙的提取和纯化43-65

3.1 实验材料和仪器44

3.

1.1 实验仪器44

3.

1.2 实验材料44

3.2 实验策略44-63
3.

2.1 提取策略的确定44-46

3.2.

1.1 提取溶剂、时间和物料比的选择45

3.2.

1.2 提取步骤45

3.2.

1.3 粗提策略的比较45-46

3.2.2 树脂的筛选46-50
3.

2.1 树脂的预处理46

3.

2.2 树脂的静态吸附解吸实验46-50

3.

2.3 大孔树脂 SP850 动态实验50-52

3.

2.3.1 树脂柱的装填50

3.

2.3.2 SP850 动态实验上样量的确定50

3.

2.3.3 洗脱剂条件的确定50-51

3.

2.3.4 SP850 树脂纯化生物碱粗品的制备51-52

3.

2.4 纯化策略的比较和选择52-54

3.

2.4.1 离子树脂动态预实验52

3.

2.4.2 液液萃取实验52

3.

2.4.3 纯化策略的选择52-54

3.

2.5 制备色谱分离条件的预实验54-55

3.

2.6 低压 C18 色谱柱纯化55-56

3.

2.6.1 低压 C18 反相填料的装填55

3.

2.6.2 低压 C18 色谱纯化条件的确定55

3.

2.6.3 低压 C18 色谱纯化石杉碱甲和石杉碱乙55-56

3.

2.7 高效液相色谱制备分离 HupA 和 HupB 纯品56-60

3.

2.7.1 制备色谱流动相梯度条件的优化56-57

3.

2.7.2 不同浓度 TFA 改性剂的比较57-59

3.

2.7.3 上样量和流速的优化选择59-60

3.

2.8 制备得产品的纯度和结构鉴定60-63

3.

2.8.1 HPLC-DAD 全波长检测60-61

3.

2.8.2 质谱核磁鉴定61-63

3.3 本章小结63-65
第四章 蛇足石杉内生真菌的分离和代谢活性初步探讨65-75

4.1 实验材料和仪器65-66

4.

1.1 实验仪器及工具65

4.

1.2 实验材料65-66

4.2 实验策略66-73
4.2.1 蛇足石杉外植体论文导读:内生真菌的筛选和初步鉴定68-714.2.2.1纯化筛选内生真菌的策略684.2.2.2部分菌种的初步鉴定68-714.2.3内生真菌发酵和其代谢活性的探讨71-734.2.3.1内生真菌发酵培养的策略714.2.3.2四种内生真菌抑菌性的初步检测71-724.2.3.3菌丝体的提取和发酵产物的HPLC检测72-734.3本章小结73-75第五章结论和展望75-775.1全文
消毒策略的确定66-68
4.2.

1.1 外植体消毒的步骤策略66-67

4.2.

1.2 表面消毒条件的确定67-68

4.2.2 内生真菌的筛选和初步鉴定68-71
4.

2.1 纯化筛选内生真菌的策略68

4.

2.2 部分菌种的初步鉴定68-71

4.

2.3 内生真菌发酵和其代谢活性的探讨71-73

4.

2.3.1 内生真菌发酵培养的策略71

4.

2.3.2 四种内生真菌抑菌性的初步检测71-72

4.

2.3.3 菌丝体的提取和发酵产物的 HPLC 检测72-73

4.3 本章小结73-75
第五章 结论和展望75-77

5.1 全文结论75-76

5.2 展望和倡议76-77

参考文献77-83
附录

一、实验仪器和设备83-84

附录

二、实验材料与药品84-85

探讨成果及发表的学术论文85-86
致谢86-87
作者和导师介绍87-88
附件88-89